藏药朗庆阿塔对四氯化碳所致肝纤维化大鼠的治疗作用论文.docVIP

　　藏药朗庆阿塔对四氯化碳所致肝纤维化大鼠的治疗作用论文 徐晶晶，彭蕴茹，沈明勤，田耀洲 【摘要】 目的研究藏药朗庆阿塔治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的药效作用及机理。方法建立CCl4 诱导的化学性肝纤维化模型，观察藏药朗庆阿塔对肝纤维化大鼠血清的ALT，AST，ALP，TBil.freell，由江苏省中医药研究院制剂室提供，批号：070706。鳖甲软肝片：0.5g×48片， 内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司，批号四氯化碳（分析纯），上海久亿化学试剂有限公司产品，批号羟脯氨酸测试盒，由南京建成生物工程研究所提供，批号：071208。层粘连蛋白（LN）、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原（CIV）和Ⅲ型前胶原氨端肽(PⅢNP)放免分析药盒，北京北方生物技术研究所生产，批号：071120。 1.3 仪器SN-695B型智能放免γ测量仪，上海原子核研究所日环仪器一厂生产；日立7060型全自动生化分析仪，日本进口；752s型紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司生产；PHY-Ⅲ病理组织漂烘仪，常州市中威电子仪器厂。 2 方法［1，2］ 2.1 肝纤维化大鼠模型的建立取10只大鼠(♀♂各半)作为正常对照组，其余130只大鼠以15％四氯化碳溶液（将分析纯四氯化碳溶于植物油中，配成150 ml/L溶液备用）按1 ml/100 g体重灌胃，2次/周，连续7周。正常对照组同法灌胃给予等容积的溶剂植物油。造模7周时，随机取2只模型大鼠，处死后解剖取肝脏做病理组织学检查，观察是否已造成肝纤维化模型。其余模型大鼠禁食后，眼眶静脉丛采血，全自动生化分析仪测定血清ALT及AST水平。 2.2 分组及给药方法将上述模型大鼠依据ALT及AST水平和体重、性别随机分为5组，即模型组（30只，♀♂各半）；阳性药组（0.55g/kg），藏药低、中、高剂量组（2.85，5.7，11.4g生药/kg）。每组20只，♀♂各半。按剂量灌胃给药1次/d，给药量均为10 ml/kg，正常组和模型组则灌胃等容积的蒸馏水。每周复称体重1次，按体重相应调整给药量，连续给药10周。 2.3 观察指标 末次给药后，禁食(不禁水)12 h，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉采血5 ml，分离血清。 2.3.1 血清学指标 ALT ，AST，ALP，T-Bil，TP，ALB用全自动生化分析仪检测。血清LN，HA，CIV，PⅢNP用放免法检测。 2.3.2 肝组织羟脯氨酸（Hyp）测定按测试盒说明操作。 2.3.3 病理组织学检查取完整肝脏，称重，计算脏器系数。取相同部位肝组织用中性甲醛固定，乙醇逐级脱水，常规石蜡包埋，HE染色，观察肝脏的病理组织学改变。并采用Masson染色及VG染色观察肝组织内纤维化程度。 肝纤维组织增生的病理学分及标准： 肝组织正常（-）； 胶原纤维含量增加，很少形成条索分隔肝小叶，可见汇管区扙大，纤维化（+）； 胶原纤维呈条索状分隔肝小叶散在分布，表现为不完全分隔假小叶（++）； 胶原纤维呈较宽的铁丝索状分隔肝小叶，表现为完全分隔成假小叶（+++）； 肝细胞脂肪变性病理学分级标准。 肝细胞内未见空泡变性（-）；部分肝细胞（＜25％）内出现空泡（+）；较多的肝细胞（25％～50％）内出现空泡（++）；大量肝细胞（＞50％）内出现空泡（+++）。 2.4 统计学处理病理组织学检查结果采用Ridit分析方法，其他数据均以 ±s表示，采用组间t检验统计学方法分析测试结果。 3 结果 3.1 动物一般情况正常组大鼠生长良好，体重自然增长，行走正常，活动敏捷，食欲正常，毛发整齐，大便成形。大鼠造模后，烦躁不安，大便溏稀，自造模第3周开始有脱毛现象，第5周开始出现腹部肿大，疑是腹水。停止造模后，各组大鼠体重开始缓慢增加，烦躁不安情绪消除，安静，嗜睡，大便逐渐正常，模型动物长出新毛。 3.2 大鼠肝脏形态正常组大鼠肝脏颜色鲜褐红色，表面光滑，边缘锐利，质地较软。7周时，模型组大鼠肝脏左叶肿大，边缘钝，质地硬，左叶颜色较浅，部分呈泥沙样土黄色，但边缘尚好，肝脏与周围器官有粘连。 3.3 藏药朗庆阿塔对大鼠体重、肝脏系数及羟脯氨酸的影响见表1。与正常组相比，模型组大鼠的肝脏系数与肝组织羟脯氨酸含量明显升高（P 0.01），体重也有降低的趋势(但无统计学差异)，表明大鼠肝纤维化模型基本形成。朗庆阿塔高、中剂量组和阳性组大鼠的脏器系数比模型组显著减少（P 0.05～0.01），高、中、低剂量组及阳性药组的羟脯氨酸含量均显著下降（P 0.05～0.01）。 表1 藏药朗庆阿塔对大鼠体重、肝脏系数及羟脯氨酸的影响（略） 与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=10 3.4