蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制研究论文.docVIP

　　蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制研究论文 刘颖 冯年平 许洁 巫珊 张欣 【摘要】 目的研究蟾毒灵的大鼠在体肠吸收机制。方法采用大鼠在体肠单向灌流吸收实验模型，并应用重量法校正灌流液体积，考察吸收部位、药物浓度、pH值及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对药物吸收的影响。结果蟾毒灵的吸收速率常数（Ka）和表观吸收系数（Papp）分别按照空肠、回肠、十二指肠、结肠的顺序下降。2～20 μg · ml-1的药物浓度对Ka和Papp无显著影响（P＞0.05）；灌流液pH值对药物吸收有影响；含P-gp抑制剂组与不含P-gp抑制剂组相比，Ka和Papp无显著性差异（P＞0.05）。结论蟾毒灵为全肠段吸收，吸收机制为被动扩散，且P-gp对药物的小肠吸收基本无影响。 【关键词】 蟾毒灵； 肠吸收； 单向灌流 Abstract：ObjectiveTo evaluate bufalin in situ intestinal absorption mechanism. MethodsThe rat single-pass intestinal perfusion technique etry e. The concentration of bufalin ined by HPLC. The effects of absorption site, drug concentration, pH value and P-glycoprotein (P-gp) inhibitor on bufalin absorption ＞ileum＞duodenum＞colon. Drug concentration had little effect on Ka and Papp (P＞0.05).pH value of the drug solution affected drug absorption. There ents. The absorption of bufalin is a passive diffusion process and not affected by P-gp. Key Bufonis中的一种有效成分。蟾毒灵具有较强的抗肿瘤作用，作用机制涉及诱导细胞凋亡、分化、抑制肿瘤的血管生成等［1～3］。近些年，有学者对蟾毒灵脂质体、透皮给药制剂等方面进行研究报道［4.freela公司）；盐酸维拉帕米标准品（中国生物制品检定所）。空白灌流液（Krebs-Ringers营养液，自配，每1 000 ml含NaCl 7.8 g，KCl 0.35 g，NaHCO31.37 g，NaH2PO4 0.32 g，MgCl2 0.02 g，葡萄糖 1.4 g）；甲醇（色谱纯，上海安谱科学仪器有限公司）；其余试剂均为分析纯。 1.2 仪器 HL-2B数显恒流泵（上海沪西分析仪器厂）；红外灯（上海安大照明电器有限公司）；Angilent1200series高效液相色谱仪； Agilent G1314A紫外检测器；Agilent 8453紫外-可见分光光度计；BP210S电子天平（德国Sartorius）；PHS-3S型pH计（上海精密科学仪器有限公司）；DKB-501A型超级恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）。 1.3 动物 SD大鼠，清洁级，雄性（200±20）g，上海中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK(沪)2003-0002。 2 方法与结果 2.1 HPLC分析方法的建立 2.1.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm, column No：99903）；流动相为甲醇∶水（70∶30）；流速 1.0 ml · min-1；柱温30℃；检测波长 300 nm；进样量20 μl。 2.1.2 方法学验证 用Krebs-Ringers营养液分别配制蟾毒灵溶液、维拉帕米溶液。分别取上述两种溶液及空白Krebs-Ringers营养液进样，在“2.1.1”项下色谱条件下测定，色谱图如图1～3所示。空白Krebs-Ringers营养液及维拉帕米在此条件下对蟾毒灵的测定均无干扰。精密称取蟾毒灵对照品适量,用空白Krebs-Ringers营养液配制0.2，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μg · ml-1的蟾毒灵溶液，进样，测定。以蟾毒灵峰面积（A）对浓度（C）作线性回归，得蟾毒灵的标准曲线方程为：A=13.107C-0.476 6，r=0.999 5(n=3)。线性范围0.2～20 μg · ml-1。高、中、低3种浓度的回收率为98.2%～101.1%（n=5）,日内、日间精密度RSD均小于2%（n=5）。 图1 空白Krebs-Ringers营养液HPLC图（略