血小板-T细胞活化抗原1论文.docVIP

　　血小板/T细胞活化抗原1论文 1985年Burns等以活化T细胞为免疫原制备了抗活化T细胞表面抗原的单克隆抗体，并将其中1株单克隆抗体Leo-A1识别的抗原命名为人T细胞系特异性活化抗原1（T lineage-specific activation antigen1, TLiSA1），实验证实TLiSA1参与了CTL细胞的活化与分化〔1-3〕。随后的实验发现TLiSA1也高表达于血小板表面，并与血小板的活化和凝集功能有关，遂将此抗原重新命名为血小板/T细胞活化抗原1（platelet and T cell activation antigen 1, PTA1）〔4〕。1997年我实验室与澳大利亚Neolecular-1, DNAM-1）序列相同。DNAM-1分子的发现过程同PTA1十分相似，最初作者制备针对人CTL的单抗.freelinidase）消化唾液酸后，其pI由3.5～4.2转变为7.8～8.2。PTA1穿膜区由25个疏水氨基酸组成。胞浆区有61个氨基酸，含有3个酪氨酸、6个丝氨酸和6个苏氨酸，胞浆区尾部含有一段EDIYVNY基序，中央酪氨酸的氨基端有2个带负电荷的谷氨酸和天冬氨酸（ED），羧基端为缬氨酸、天冬酰胺和酪氨酸（VNY），此基序可作为非受体型蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase, PTK）的底物。并可以和蛋白酪氨酸磷酸酶2（protein tyrosine phosphatase 2, PTP2）氨基端的SH2结构域结合。另外，在PTA1胞浆区还存在着酪蛋 白激酶Ⅱ（casein kinase Ⅱ）和PKC作用的底物S/T结构。胞浆区的上述结构和基序提示PTA1分子可能参与T细胞和血小板活化的信号转导过程〔4，5〕。人、猿、猴PTA1分子cDNA及蛋白水平的同源性为93%～95%，表明PTA1在生物进化过程中高度保守并可能具有重要的功能。 Burns等通过Leo-A1单抗亲和层析的方法从血小板上纯化了PTA1分子，并进行了蛋白部分序列测定，证实PTA1分子为一全新的分子。通过纯化的PTA1分子再次免疫制备了抗PTA1的单克隆抗体NEA刺激的Jurkat细胞膜表面，并且平均荧光强度相同，但NEA刺激的Jurkat细胞膜表面着色，当增加Jurkat细胞膜通透性后，NEA刺激的Jurkat细胞及血小板胞膜，再用磷酸肌醇磷脂酶C（phosphatidyl inositol phospholipase C）处理细胞，然后在Jurkat细胞上清中可以检测到从细胞膜上释放的PTA1抗原，表明PTA1分子至少是部分通过糖基磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidyl inositol, GPI）方式锚定于细胞膜上的。其它参与细胞信号转导的膜表面分子中，有部分是通过GPI方式锚定于细胞膜表面的。而在血小板上清中未发现PTA1抗原的释放，可能血小板PTA1分子主要以跨膜方式连接于血小板胞膜上，另一种可能是血小板胞膜对外源性酶的作用不敏感。 PTA1的表达及表达调节 已获得的实验证据表明，PTA1主要表达于巨核/血小板谱系、活化T细胞、NK细胞、单核细胞、胸腺细胞、及多种转化的造血细胞系。PTA1较高水平地表达于血小板，平均1 200个分子/每个血小板〔4〕。PTA1在巨核/血小板谱系有组成性表达，并且受到TPA（PKC激活剂）及PHA的上调。在部分白血病细胞系中，PTA1具有异质性表达(如红白血病细胞TF-1、巨核细胞Dami及HEL组成性表达PTA1，而红白血病细胞K562不表达PTA1〔9〕。上述结果提示，PTA1可能与髓样干细胞→CFU-GEMM→巨核细胞→血小板的发育过程及功能有关。另外，某些T细胞杂交瘤、T细胞白血病细胞高表达PTA1，HUT-102B2细胞系表达较高水平的PTA1，长臂猿细胞系MLA-144也高表达PTA1分子〔8〕。 PHA活化的正常T细胞及混合淋巴细胞反应中的活化T细胞表达PTA1分子，并受细胞因子及其它活化剂的调节，其中IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、TNF-α及佛波酯PMA（phorbol ester）均对PTA1表达有上调作用。IL-1和IL-2最佳反应剂 量为200U/ml，PMA的最佳浓度为20～50ng/ml。几乎所有的刺激实验均表明PTA1在刺激后半小时至1小时内引起Leo-A1 McAb结合的减少，随后在10～20小时内PTA1的表达达到高峰。TGF-β对PTA1的表达有下调作用〔3〕。 PMA和IL-2对PTA1表达的上调作用依赖于蛋白质的合成。100μg/ml放线菌酮（cycloheximide）即完全抑制了IL-2和PMA对PTA1表达的诱导。而IL-1的刺激实验有所不同，在实验早期PTA1的表达没有