生皮组织学实验.pptVIP

固定的原理 沉淀作用：一些物质可以在固定剂的作用下发生沉淀。 变性作用：蛋白质变性后最明显的变化就是失去了可溶性，本身成为沉淀状态。例如酒精对蛋白质的变性作用 蛋白质凝胶化：固定液与蛋白质间起了化学上的结合，改变了分子结构，但不产生沉淀，而使蛋白质凝胶化，且不溶于水 实验过程 固 定 常用固定剂 波音氏固定液： 饱和苦味酸水溶液 75mL 40%甲醛溶液 25mL 冰醋酸 5mL 10%甲醛溶液 40%甲醛溶液 100mL 磷醋二氢纳 4g 磷酸氢二钠 6.5g 蒸馏水 900mL 实验过程 固 定 固定剂的选择 固定剂的好坏，直接关系到能否制得好的切片，因此，必需选择适当的固定剂，在选择固定剂时要考虑下列几点： I. 能否沉淀或凝固蛋白质、脂肪，类脂或碳水化合物 2. 穿透组织的速度 3．是否使组织膨胀或收缩 4．对染色的影响。 实验过程 固 定 包 埋 包埋的目的 有些样品比如牦牛皮、羊皮等组织比较松软，在冰冻切片过程中极易破碎 给组织以某种支撑，防止组织在切片和染色的过程中破碎 实验过程 包埋方法 1、明胶包埋： 10%明胶，37℃，24h----- 25%明胶，37℃，24h----- 25%明胶，冰箱冷凝 不经高温和有机溶剂的处理，组织变形小，脂肪等组织成分不会丢失。适用于原料皮及其加工过程中组织成分和组织结构的观察，也适用于观察成品革的缺陷和进行不同质量成品革的对比研究。缺点是有不少传统的染色方法无法或很难着色，切片不能切得太薄。如切片厚度小于12uM，易破碎 实验过程 包 埋 包埋方法 2、石蜡包埋： 须经50~60℃的温度和有机溶剂的处理，皮组织的变形和收缩作用剧烈。有些组织成分如脂肪在包埋中会丢失，这对观察纤维形态的变化会产生根大的干扰。 实验过程 包 埋 切 片 冰冻切片法 取出经固定的样品，冲洗，在冰冻切片机上切片，片厚一般为8~25um 明胶包埋切片法 石蜡包埋切片法 实验过程 切 片 实验过程 滑走式切片机 旋转式切片机 染 色 不同的染色方法染色也的配制及染色步骤不完全相同，具体的染色步骤见试验指导书 一般有下列基本步骤 附贴、染色、水洗、分化、脱水透明等 实验过程 分 化：组织经过染色后，需用适当的化学药品退去不需要上染的部分，以便使染料结合牢固的部分更为明显、清晰的显现出来，这一操作称为分化。 分化非常重要：分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象 实验过程 染 色 分化剂分类： 酸类 它能使留在组织内的金属离子分离，并与之化合而形成可溶性的盐类，从而腿去一部分额色。比如：1%的盐酸酒精溶液 氧化分化剂 具有漂白作用，能把组织上所有的染料无选择地氧化为无色物质，但其作用速度较慢．故可先将与组织中着色不牢固的部分氧化，而着色牢固部分则可保留必要的颜色，从而达到分化的日的。如：高铁氰化钾，高锰酸钾、重铬酸钾、苦味酸等 实验过程 染 色 分化剂分类： 媒染分化剂：媒染剂能促使组织和染色剂相结合。如果将已染色的切片再放到媒染剂的溶液中，则可使已经和组织相结合的染色剂脱去，这是媒染剂的另一种功能。从这个角度看，又可称之为“媒染分化剂”。它对组织既能使染料附着，又能脱去染料，二者初看似乎矛盾，其实不然，这是因为染色剂和媒染剂的比例关系不同，当溶液中媒染剂的量超过了染色剂的量时，占有压倒优势的媒染剂就把已经和组织细胞相结合的染色剂夺取过来，使组织细胞脱色，即为分化现象。当然，含染料较少的组织必然先被脱色，而着色较浓的组织随着分化时间的控制，即可保留必要的颜色，从而达到分化的目的 实验过程 染 色 脱水与透明：除去不染色的切片及水溶性的封固剂封固的切外，其它各种非水溶性封固剂封固的切片，在染色、分化、水洗后均需脱水与透明。这是因为水的折射率比组织低得多，切片不够透明，显微镜观察模糊不清，且切片不能持久保存。常用的脱水剂为酒精，透明剂为二甲苯。 实验过程 染