甘油保存菌种方法的改良介绍.PDFVIP

维普资讯 670 实用预防医学 2005年 6月 第 12卷 第 3期 PracticalPreventiveMedicine，Jun．2005，Vol12，No．3 文章编号 ：1006—3110(2005)03 0670 02 甘油保存菌种方法的改 良 钟志宏，李启星，唐小异，邱 月 摘要： 目的 将甘油原液保存菌种方法进行改 良，寻找一种简便易行的保存实验室各种菌种的方法。 方法 将 一 般细菌的菌种纯化后接种于普通肉汤管，4～6h增菌后，加入适量甘油 一生理盐水保存液，一20℃冰箱保存；链球菌属 和奈瑟氏菌属的菌株纯化后接种于血清肉汤管，在 5％～10％ ( 中经 8～10h增菌后，加入适量保存液， 80℃低温冰 箱保存；真菌菌种纯化后直接取菌洗入肉汤，不做培养，加入保存液后 ，一20℃冰箱保存。 结果 在连续 3年实验期 内，各菌种保存效果 良好，且其形态结构、染色特性 、生化反应等与标准株相符。 结论 使用甘油 生理盐水保存法来 保存菌种，各菌种保存时间长，方法简便 ，特别是使链球菌、奈瑟氏菌和弧菌等需特殊保存方法保存的菌株在一般实验室 得 以保存。 关键词 ： 菌种保存；细菌保存；冷冻保存；甘油 中图分类号：R37 文献标识码 ：H 菌种的保存不仅关系到微生物学的教学 、科研 、质控等，而 1．1．3 培养基 普通营养琼脂 、血琼脂培养基 、半固体培养 且与临床上一些疑难菌株的鉴别也有着至关重要的联系，同时 基 、沙氏琼脂 、营养肉汤、血清肉汤，每种培养基均采用常规方 也是微生物学实验室的一项重要工作 。因此 ，选择一种简便易 法配制 。 行、对设备要求不高的菌种保存方法成了每个微生物学工作者 1．2 方 法 的共同愿望。 1．2．1 保存方法 将纯化后的菌株根据菌种不同分别划线接 种于普通营养琼脂平板、血液琼脂平板、巧克力琼脂平板 、沙 氏 l 材料与方法 琼脂斜面 中，37℃培养 l8～24h，奈瑟 氏菌置于 37℃含 5％～ 1．1 材料 l0％( 环境下培养。用接种针取上述典型菌落接种 肉汤管， 1．1．1 实验菌种 大肠杆菌 (Escherichiacoli，44101)、产气肠 37℃恒温振荡培养箱培养 4～6h(亦可置于普通温箱培养 6～ 杆菌 (E．aerogene．s，45102)、变形杆菌 (P．mirabilis，49027)、伤寒 8h)；链球菌和奈瑟氏菌接种血清 肉汤管，5％～l0％( 环境 沙门氏菌(Salmonellatyphi，50402)、甲型副伤寒沙 门氏菌 (S．pa— 下培养 8～l0h；真菌用接种环取菌洗入肉汤管，不做培养：然 ratyphiA，50001)、乙型副伤寒沙门氏菌 (S．paratyphiB，50602)、 福氏志贺菌(S．flexneri，51573)、宋内志贺菌 (S．~)nnei，51334)、 后按 5份培养液加入 2份保存液的比例加入 已灭菌的保存液， 分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管中，每株细菌保存多 粪产碱杆菌 (A．faecalis，40001)、铜绿假单胞菌 (P．aemginosa，