第十一章 PAXgene Blood DNA Kit-人全血中纯化gDNA.pdfVIP

PAXgene Blood DNA Kit （Cat#761133 ） 客户需要自己提供的仪器和试剂：  PAXgene Blood DNA Tubes  100%异丙醇  70% 乙醇  移液器和枪头  离心机要求：转速可达2500 x g，摆动式转子，可以处理50ml 的离心管。  能达到65°C 的加热模块或水域槽  涡旋混合器 注意事项：  用PAXgene Blood DNA Tubes 收集的血液样品可以在15–25°C 下储存14 天，2–8°C 下储存28 天，–20°C 储存3 个月。  PAXgene Blood DNA Tubes 在冷冻时需要垂直用线捆好放置，或者放置在塑料袋中， 不要放置在泡沫聚苯乙烯的托盘中，因为可能会引起试管炸裂。  如果需要长期储存样品，建议放置于–70°C，如果试管可以在–20°C 以下保存，先 在–20°C 放置24h，然后再转移至–70°C 或者–80°C 。  可以在室温18–25°C 下孵育2h，解冻捆好的PAXgene Blood DNA Tubes，或者在 37°C 水域孵育15min 也可以，小心地翻转PAXgene Blood DNA Tubes 10 次左右。  冷冻的PAXgene Blood DNA Tubes 容易受压破损，为了降低在运输过程中的这种风 险，冷冻的管子应该以玻璃制品来对待，使用者应该按照运输方法来做。 离心条件的优化： 为了获得最佳的核酸回收率，离心步骤是非常重要的。在这个操作步骤中我们使用 的是g 的离心力，如果您的离心机没有这个单位，可以按以下的计算方法换算： rcf = 11.18 x r x (rpm/1000)2 rcf 是相对离心力，r 是转子的半径，rpm 就是离心机的转速。 操作步骤： PAXgene Blood DNA Kit 用于纯化8.5ml （收集于PAXgene Blood DNA Tubes （cat.no.761125 ））人全血中的基因组DNA，PAXgene Blood DNA Tubes 和PAXgene Blood DNA Kit 是收集全血分离基因组DNA 的一个完整的体系。 所有的离心步骤都应该在室温下进行(15–25°C) 。 开始之前须知：  在室温18–25°C 下孵育2h 解冻捆好的PAXgene Blood DNA Tubes，或者在37°C 水 域孵育15min 也可以，小心地翻转PAXgene Blood DNA Tubes 10 次左右。  步骤8 和17 中需要用到能加热至65°C 的加热模块或水域槽。  向PreAnalytiX Protease 冻干粉中加入1.4ml 的Buffer BG4 （重悬buffer），解冻后 的PreAnalytiX Protease 应该储存于2–8°C 或者整体储存于–20°C。  对于每一个样品，将5 ml Buffer BG3 （消化液）和50ul 重悬的PreAnalytiX Protease 混匀。例如：要处理10 个样品，混匀50 ml Buffer BG3 和500 μl PreAnalytiX Protease，这个混悬液应该在实验开始之前再准备。 步骤： 1、将PAXgene Blood DNA Tube 中的血液倒入含有25ml Buffer BG1 的处理管中。盖好 管盖，为了避免把处理管的蓝色管盖弄裂，不要拧得过紧，只需要第一次感觉拧紧了 就行，翻转管子5 次混匀。 如果PAXgene Blood DNA Tube 中的血液分成的血浆和血红细胞，需要小心地翻转管子 10 次来混匀样品。 2、2500 x g 离心5min。 3、弃上清液，将管子置于试管架上。 有时候沉淀物很松散，在倾倒的时候需要慢一点。 4 、加5 ml Buffer BG2，盖好管盖，强力涡旋5s 洗涤沉淀物。 5、2500 x g 离心3min。 6、小心地弃上清液，将管子置于试管架上。 有时候沉淀物很松散，在倾倒的时候需要慢一点。 7、加入5 ml Buffer BG3/PreAna