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免疫组织化学染色技术 法 医 学 院 官 大 威 第一节 常规组织学染色技术概述 宏观 微观 超微结构 基因水平 组织形态学研究技术的种类： 一、病理大体组织标本的染色方法 在标本制作中，为了某种特殊目的，突出显示标 本的重要部分，借助组织切片的特殊染色方法对标本 进行染色，将病变器官及不同组织成分用染料染成不 同的颜色，以便于区分大体标本的不同成分和病变特 点，如： 脂肪组织染色法 目的：主要用于心、肝、肾脂肪变性，动脉粥样 硬化大体标本的染色 试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ 结果：病变处脂肪组织呈橙黄色 早期心肌梗死染色法 目的：显示早期心肌梗死的区域 试剂：0.1% NBT(硝基四唑蓝) / 0.2 mol / L PBS (pH 7.6) 方法：将2-3 mm 厚新鲜心肌大片放入试剂中，37 °C 孵育20 min 。 结果：正常心肌呈蓝色，早期心肌梗死区、纤维结缔 组织、瘢痕组织呈浅蓝色或不显色。 注意：新鲜标本，尸检心肌不超过6小时。 二、光学显微镜下的组织学染色方法 • 常规HE染色 （hematoxylin and eosin staining ） • 组织学特殊染色 1. Mallory 三染色、Masson三染色 2. 神经纤维的镀银染色 3. 其他的特殊染色，包括钙、铁、铅、 铜、黑色素和脂褐素、细胞DNA和 RNA 的染色等 上述的各种染色方法只能在细胞水平上显示组织结构的 形态改变。 三、超微结构的观察 • 光线波长的限制，光学显微镜的分辨率极限为0.2μm 有效放大倍数最高不超过2000倍。 • 电镜的分辨率最佳可达0.14nm，放大倍率最高可达100万倍。 第二节 免疫组织化学染色技术 Immunohistochemical technique 由于该技术主要是用于研究和观察细胞中的某些 结构或分子物质和组织细胞间的成分，因此现又称为 免疫细胞化学技术。 根据标记物的不同，免疫细胞化学技术可分为： 1. 免疫荧光细胞化学技术 2. 免疫酶细胞化学技术 3. 免疫铁蛋白技术 4. 免疫金-银细胞化学技术 5. 免疫电子显微镜技术 一、免疫组织化学染色方法的原理 • 抗原（antigen ） 1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系统 发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质 （抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性结合 反应的物质。抗原具有两种性能： （1）免疫原性 （immunogenicity ） 指抗原分子具 有诱导机体产生免疫应答的特性。 （2 ）反应原性 （reactogenicity ）指抗原分子与抗 体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反应 的特性。 2. 抗原的分类 完全抗原、半抗原 免疫学分类 胸腺依赖抗原与非依赖抗原 外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿 瘤相关抗原等 临床分类 同种异型抗原：人类白细胞抗原、 血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物 等之间存在的共同抗原 • 抗体（antibody ） 1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答， B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白， 称为抗体。