第8章 氨基酸的代谢控制与发酵.ppt

第八章 氨基酸的代谢控制与发酵 授课教师：张 侠 E-mail：zhangxia79@yeah.net 第一节 概述 大约20种氨基酸构成了数目庞大的各种肽类和蛋白质。其中8种氨基酸是人体必需的，它们分别是L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-异亮氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-亮氨酸和L-缬氨酸。 一、氨基酸的应用与市场 氨基酸的应用是基于它们的营养价值、风味、生理活性和化学特性。 主要应用领域是食品、饲料、化妆品、医药，也用作化学工业的中间体。据估计全世界每年氨基酸市场为40－50亿美元，其中35%用于食品、50%用于饲料和15%用于医药和化妆品。 1、食品领域 氨基酸大多无味，但它们是自然芳香的前体。 谷氨酸钠（味精）是所有氨基酸中最大生产品种，全世界年产量达100万吨（中国大陆约为60万吨）。 二肽和寡肽大多具有苦味，但二肽L-门冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯（Aspartame，阿斯巴甜）是个例外，它比蔗糖甜150－200倍，现已广泛作为人造甜味剂，应用于低热量的饮料等。目前，阿斯巴甜的世界年产量已超过2万吨。 2、饲料领域 组成蛋白质的氨基酸几乎半数对于动物（如猪和家禽）来说是必需的。 蛋氨酸和赖氨酸的全世界年产量分别为35万吨和40万吨。 近年来，由于发酵水平的提高，苏氨酸成功地进入饲料市场，估计全世界年产量已达1.5万吨。 L-色氨酸也是一种限制性氨基酸，尤其在以玉米为基础的饲料中。但由于生产成本较高，目前L-色氨酸的世界年产量仅500吨（日本400吨），因此还不能广泛作为饲料添加剂使用。 3、医药领域 L-氨基酸输液是术前和术后的营养治疗剂。 标准氨基酸输液含有8种必需氨基酸，2种半必需氨基酸（L-精氨酸和L-组氨酸），以及几种非必需氨基酸，通常包括甘氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和L-谷氨酸。 L-门冬氨酸钾镁常用于消除疲劳和治疗心力衰竭和肝脏疾病。 4、工业领域 谷氨酸制成的聚谷氨酸树脂具有天然皮革性能，因此可用于制造人造皮革和涂料。谷氨酸还可以制造人造纤维。 甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸等可用于制造表面活性剂、缓冲剂和抗氧化剂。 二、氨基酸的生产方法 蛋白质水解法：早期味精生产、复合氨基酸 化学合成法：DL-蛋氨酸，甘氨酸，DL-丙氨酸 微生物发酵法 1956年，木下竹郎（Kinoshita）首次报道分离出谷氨酸产生菌；次年发酵法工业化生产谷氨酸首先在日本问世，继而迅速掀起一股氨基酸发酵研究的热潮。 经过半个世纪的努力，目前几乎所有氨基酸都能用微生物法生产（胱氨酸和半胱氨酸除外）。 氨基酸发酵属于典型的代谢控制发酵，这是由于氨基酸的生物合成受到严格的反馈调节。 要进行氨基酸发酵，就必须采取某些人为的手段以打破微生物的反馈调节机制，从而大量积累目的氨基酸。 采用微生物法生产氨基酸的情况如下： 1）使用野生型细菌生产氨基酸（L-谷氨酸、 L-丙氨酸等）； 2）使用突变株生产氨基酸（L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-缬氨酸、L-精氨酸、L-瓜氨酸、L-鸟氨酸、L-高丝氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-组氨酸等）； 3）使用添加前体的方法生产氨基酸（如用邻氨基苯甲酸生产L-色氨酸；甘氨酸生产L-丝氨酸等）； 4）使用酶法生产氨基酸（利用微生物细胞或微生物产生的酶来制造氨基酸，如以延胡索酸和铵盐为原料，经天冬氨酸酶催化生产L-天冬氨酸）； 5）应用基因工程、蛋白质工程和代谢工程方法育成的菌株，进行发酵生产（L-羟脯氨酸）。 氨基酸本身的合成在不同生物体中，有较大的差异，但是许多氨基酸的合成途径在不同生物体中也有共同之处。 按照起始物可将氨基酸的合成分成几个家族： ㈠ 谷氨酸族（α-酮戊二酸族） 包括：谷氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、赖氨酸 和脯氨酸； ㈡ 丙酮酸族 包括：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸； ㈢ 天冬氨酸族（草酰乙酸族） 包括：天冬氨酸、天冬酰胺、苏氨酸和异亮氨酸； ㈣ 磷酸甘油酸族 包括：甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸； ㈤ 芳香族 包括：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸； 另外，组氨酸的合成为单独的一条途径。 第二节 谷氨酸发酵的代谢控制育种 1957年日本率先采用微生物发酵法生产谷氨酸，被誉为现代发酵工业的重大创举，使发酵工业进行代谢控制发酵的阶段。 目前全国有近50家工厂生产味精，年产量约为60万吨，居世界首位。 一、谷氨酸的生物合成与发酵生产 （1）糖酵解途径 （EMP） （2）磷酸已糖途径 （HMP) （3）三羧酸循环(TCA) （4）乙醛酸循环 （DCA） （5）二氧化碳固定反应 （6）α-KGA的还原氨基化反应 ㈡ 谷氨酸glutamic acid合成的内在因