细胞的原代培养(cell primary culture).pptVIP

实验用品 实验材料： ? （肝素）抗凝血 注射器中吸入0.1 ml 180 IU／ml肝素钠溶液，鸡翅下静脉采血5 ml。 实验试剂： （1）RPMI 1640 培养液 （3）肝素钠（180 IU／ml） （5） PHA（2 mg/ml） （7）?5％NaHCO3 （9）? 2％碘酒棉球 （11） 1%台盼蓝 实验用品 （2）? 小牛血清 （4）? 青、链霉素 （6）? Hank’s液 （8）? 1N 盐酸 （10）?75％酒精棉球 实验步骤 （1） 配培养液： RPMI 1640基础培养液 80％ 小牛血清 20％ 肝素（180 IU／ml） 3.6 IU/ml PHA（2 mg/ ml） 40 ?g/ml 青、链霉素 100 IU/ml 100 ?g/ml 调pH至6.8－7.2，0.22 ?m滤膜过滤除菌。 实验步骤 （2）采血：肝素抗凝，静脉采血。 （3）分离淋巴细胞 （4）洗涤淋巴细胞 （5）细胞计数、细胞活力检查 （6）稀释培养 实验步骤 （7）? 结果：培养3天后观察结果。 ?? 细胞计数：淋巴细胞增殖情况。 注意事项 过滤消毒 淋巴细胞的分离 洗涤：Hank’s 液、RPMI 1640培养液4 ml 各洗涤一次。 4. 计数：浓度3-5×105个/ml，1 ml /10 ml瓶。 5.培养 原细胞悬液细胞数/ml=n/4×10 000×m n: 4大格中的细胞总数 m: 稀释倍数 实验报告 简述体外培养细胞的形态特征。 淋巴细胞分离液的作用？ 细胞培养获得成功的关键要素是什么？ 实验结果：培养后淋巴细胞增加的数量、提高百分率。 Thanks ! 细胞的原代培养 (Cell primary culture) 实验 十一 背景资料 原代培养(primary culture)： 从生物体取材进行培养，中途不分割培养物、不更换培养物的生长器皿。 细胞的生长条件： ① 无菌 ② 温度 ③ pH ④ 渗透压 ⑤ 氧气 ⑥ 营养及生长调节因子 背景资料 培养细胞的生长类型 贴附型 成纤维细胞型细胞 上皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞 悬浮型 1、成纤维细胞型： 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形 核，胞质突起，生长时呈放射状。 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起 源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管 内皮等常呈本型状态。 培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为 成纤维细胞。 背景资料 2、上皮型细胞： 细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细 胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动， 处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生 物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮 型形态。 背景资料 3、游走细胞型： 呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。4、多型细胞型： 有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，统归于此类。 背景资料 悬浮型： 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这 类细胞容易大量繁殖。 见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及 白血病细胞。 背景资料 原代细胞培养的一般方法: 植块培养法(explant culture) 分离(散)细胞培养法 (dissociated cell culture) 背景资料 一、心肌细胞、表皮细胞的培养 二、淋巴细胞的培养 心肌细胞、表皮细胞的原代培养 实验目的 了解细胞体外培养的原理、基本方 法，掌握无菌操作方法及注意事项。 学习观察体外培养细胞的形态及生长 状况。 实验原理 来自机体的细胞、组织、器官； 类似体内的体外环境； 人工培养条件下生存、生长、繁殖。 主要仪器： 纯水仪；离心机；CO2培养箱； 电热干燥箱；高压蒸汽消毒锅；过滤器及0.22 ?m滤膜； 超净台；眼科剪、镊；培养瓶；青霉