细菌生物学检验技术(动物实验和药敏实验)4.pptVIP

无关作用 协同作用 累加作用 拮抗作用 无关作用 拮抗作用 累加作用 协同作用 试管棋盘（方阵）稀释法 微量棋盘（方阵）稀释法 琼脂棋盘（方阵）稀释法 （二）体外联合抑菌试验——稀释-棋盘法 16/2 16/4 16/8 16/16 16/32 16/64 8/2 8/4 8/8 8/16 8/32 8/64 4/2 4/4 4/8 4/16 4/32 4/64 2/2 2/4 2/8 2/16 2/32 2/64 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 0.5/2 0.5/4 0.5/8 0.5/16 0.5/32 0.5/64 ←药物A稀释 判断标准：FIC指数＜0.5，协同作用；0.5~1 相加作用；1~2，无关作用；＞2拮抗作用。 药物B稀释→ 时间-杀菌曲线法 将各管孵育4h、12h及20h等不同时期，自各单药MIC管及联合MIC管中分别取0.001ml液体作次代培养，分别测定并绘出两种药物对测试菌的单独杀菌曲线和联合后的杀菌曲线。 * 待改 a.培养基：pH、深度、硬度、含水量 b.抗菌药物纸片：重量、吸水性、直径、酸碱度 c.接种菌量：培养，稀释（包括麦氏比浊标准的配制、正确使用和保存） d.操作过程：加纸片，培养 e.质量控制： -药+待测菌，+药+标准菌 阳性对照的质量控制图 （三）影响K-B纸片药敏试验结果的因素 产超广谱β-内酰胺酶(extend spectum β-lactamase, ESBL)的肠杆菌 超广谱β-内酰胺酶是由质粒介导的β-内酰胺酶，可水解青霉素类、头孢菌素和氨曲南，主要在大肠埃希菌和克雷伯菌属等肠杆菌科细菌中产生。 CAZ--头孢他啶，30μg；CTX--头孢噻肟，30μg；CLA--克拉维酸，10μg。 临床意义 ESBL常见于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌等菌株。对所有青霉素类的药物、l-4代头孢菌素、氨曲南、所有的β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂抗生素均耐药，常引发院内感染。 可考虑使用美罗培南(MEM)和亚胺培南(IPM）进行治疗。 耐万古霉素的肠球菌 定义: 对30μg万古霉素纸片抑菌圈直径≤19mm， 或MIC≥32μg/ml应视为耐万古霉素肠球菌（vancomycin resistant enteroccoccus，VRE）。 临床意义 耐万古霉素肠球菌目前尚无有效的治疗方法，但是对青霉素敏感的VRE可用青霉素和庆大霉素联合治疗，若对青霉素耐药而不是高水平耐氨基糖苷类可用壁霉素和庆大霉素。另外氯霉素、红霉素、四环素（或多西环素、或米诺环素）及利福平可用于VRE株。 耐青霉素的肺炎链球菌 1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径19mm且MIC2μg/ml应视为耐青霉素肺炎链球菌（penicillin resistant strepttococcus paeumoni，PRSP）。 临床意义 PRSP对氨苄西林、 氨苄西林/舒巴坦、 头孢克肟、 头孢唑啉的临床治疗疗效很差，治疗时参考药敏结果选择药物，经验治疗重症感染时，可用头孢曲松或头孢噻肟联合万古霉素用药。 耐甲氧西林的葡萄球菌（methecillin resistance staphylococcus，MRS） 1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10mm，或MIC≥4μg/ml的金黄色葡萄球菌, 1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17mm，或MIC≥0.5μg/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称耐甲氧西林葡萄球菌。 临床意义 对所有β-内酰胺类药物均无效,并对氨基糖甙类、大环内脂类、克林霉素和四环素等抗生素多重耐药。治疗首选药物为万古霉素。 （一）原理 稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用的体外方法，所测得的某抗菌药物能抑制检测菌肉眼可见生长最低浓度称为最低(或最小)抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC) 三、稀释法（dilution test） 肉汤稀释法 用MH肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释后,再接种待测菌，定量测定抗菌药物抑制或杀灭待测细菌的最低抑菌浓度（MIC）或最低杀菌浓度（MBC）。 琼脂稀释法 将不同浓度抗菌药物分别均匀混于MH琼脂培养基中，配制出含各种浓度药物的平板，使用微量多头接种仪接种细菌，孵育后观察细菌在含不同浓度药物的平板上的生长情况，以抑制细菌生长的平板所含的药物浓度测得最低抑菌浓度（MIC）。 （二）材料和方法 a.抗菌药物：原液浓度常为测定最高浓度的10倍以上。肉汤稀释法为1280μg/ml，琼脂稀释法为5120μg/ml。过滤除菌，分装，低温保存。标明名称、浓度、制备日期。 b.菌液：同K-B法 c.操作：将抗菌药物按实验设计要求梯度稀释。定