第十三章 基因信息的传递.ppt

端粒酶(telomerase) 线性DNA在复制完成后，其末端由于引物RNA的水解而可能出现缩短。故需要在端粒酶（telomerase）的催化下，进行延长反应。 功能： 合成端粒DNA，维持端粒的长度 5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | | 3′ T C G A A G T C C T A G C G A C 5′ 3? ? 5?外切酶活性 5? ? 3?外切酶活性 ? 能切除引物和突变的 DNA片段。 能辨认错配的碱基对，并将其水解。 核酸外切酶活性 （一）原核生物的DNA聚合酶 ? DNA-pol Ⅰ ? DNA-pol Ⅱ ? DNA-pol Ⅲ ? DNA-pol Ⅳ ? DNA-pol Ⅴ 催化DNA聚合 参与DNA损伤的应急状态修复 校读、修复合成、切除引物填补空隙 功能 20 40 400 分子数/细胞 10 1 1 亚基数 － － + 5?? ??外切酶活性 + + + ??? 5?外切酶活性 + + + 5?? ??聚合酶活性 pol III pol II pol I E. Coli中的DNA聚合酶P245 功能：校读，去除RNA引物，填补空隙，参与DNA损伤修复。P245 DNA-pol Ⅰ 此酶研究得最早，也是现在了解得最清楚的一种DNA聚合酶。 尽管DNA-pol I是第一个被鉴定的DNA聚合酶，但它并不是DNA复制的主要聚合酶。主要证据如下：[1]纯化的大肠杆菌DNA-pol I在37℃下催化DNA合成的速率约为10个核苷酸/秒，而体内DNA合成速率要比此高出10～100倍。[2]DNA-Pol I仅能催化延长大约20个核苷酸的聚合。[3]大肠杆菌的一种突变株中，此酶的活力正常，但染色体DNA复制不正常。[4]在另一种突变株中，DNA-pol I的活力只有野生型的1%，但是DNA复制却正常。 DNA聚合酶II (DNA-pol II) ? 具有5′→3′的聚合酶活性。 ? 只是在无polⅠ及polⅢ的情况下暂时 起作用。 ? 对模板的特异性不高, 参与DNA损伤 的应急状态修复。 1970年发现了DNA-pol II。该酶也不是复制的主要聚合酶，因为此酶缺陷的大肠杆菌突变株的DNA复制完全正常。DNA-pol II只有在无?DNA-pol I及DNA-pol III的情况下才发挥作用，因而其真正的功能现在并不清楚，有些人认为它可能在损伤修复中有特殊作用。 DNA聚合酶III (DNA-pol III) 是复制延长中真正起催化作用的酶。 由10种亚基组成不对称的聚合体。 α，ε，θ亚基组成核心酶，α亚基具有5→3的聚合活性，ε亚基具有3→5外切酶活性， θ亚基可能起组装作用。 β亚基(DNA夹子)能夹稳模板链，负责酶沿DNA模板滑动的作用。 其余亚基统称为γ-复合物, 是DNA夹子加载蛋白。 DNA-pol Ⅲ 大肠杆菌每个细胞中只有10～20个DNA pol -III酶分子，但催化脱氧核苷酸掺入DNA链的速率分别是DNA聚合酶I和II的15倍和30倍，可达150个核苷酸/秒。并且它可连续催化多达5000个核苷酸的加入，因此是真正意义上的DNA复制酶。DNA-pol III也具有3→5和5→3核酸外切酶活性。 此酶的分子量为140KD左右。DNA-pol III全酶是由α、β、γ、δ、δ′、ε、θ、τ、χ、ψ10种亚基组成的不对称二聚体。其中，α，ε，θ组成核心酶，具有聚合酶活性和3→5核酸外切酶活性，其余的亚基统称为γ-复合物。实验证明，ε亚基可能具有碱基选择功能；β亚基位于全酶两边，起着夹住模板链，使酶沿模板链滑动的作用，此外，β亚基还有辨认引物的作用；其它亚基的具体作用并不十分清楚。 （二）真核生物的DNA聚合酶P250 DNA-pol ? 起始引发，有引物酶活性。 复制的主要酶，有解螺旋酶活性。 参与低保真度的复制。 在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。 在线粒体DNA复制中起催化作用。 DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? 基本性质与原核细胞DNA聚合酶一致。