核酸蛋白检测中常见问题解析课件.pdfVIP

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实用技巧 核酸蛋白检测中常见问题解析 显示屏 检测后,显示屏显示: A230 浓度 稀释度 A260 0.05 (最好在0.1-1.0 范围内) 比率A /A 1.8-2.0 A 260 280 280 A 接近于 0.0 320 比率A /A 2.0 260 230 A260 nm 核酸最高吸收峰的吸收波长 吸光值是否在0.1-1.0 之间? 如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使 之在此范围内。如果是高浓度样品,也 最佳测量值的范围为0.1 至1.0 可以使用 UVette 2 mm 光程长度(即 将UVette 比色皿旋转90o 插入)。 稀释溶液中吸光物质浓度的吸光度可用 朗伯—比尔定律表示: 朗伯 - 比尔定律: 如果吸光度小于 0.05 ,检查是否存在 A = log I = εc d 0 A = ε· c · d A 吸光值 I 操作因素(如移液不准确,样品内有悬 I 入射光强度 0 浮物等)影响。 I 透射光强度 50 µl 样品中DNA 的浓度必须大于 c 吸光物质的摩尔浓度(mol/L) 2.5 µg / ml (= 125 ng)双链DNA d 光通过的液层厚度(cm ) ε摩尔吸光系数,(L

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