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实用技巧
核酸蛋白检测中常见问题解析
显示屏
检测后,显示屏显示: A230
浓度
稀释度 A260 0.05
(最好在0.1-1.0 范围内)
比率A /A 1.8-2.0 A
260 280 280
A 接近于 0.0
320
比率A /A 2.0
260 230
A260 nm
核酸最高吸收峰的吸收波长 吸光值是否在0.1-1.0 之间? 如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使
之在此范围内。如果是高浓度样品,也
最佳测量值的范围为0.1 至1.0 可以使用 UVette 2 mm 光程长度(即
将UVette 比色皿旋转90o 插入)。
稀释溶液中吸光物质浓度的吸光度可用
朗伯—比尔定律表示: 朗伯 - 比尔定律: 如果吸光度小于 0.05 ,检查是否存在
A = log I = εc d
0
A = ε· c · d A 吸光值 I 操作因素(如移液不准确,样品内有悬
I 入射光强度
0 浮物等)影响。
I 透射光强度
50 µl 样品中DNA 的浓度必须大于 c 吸光物质的摩尔浓度(mol/L)
2.5 µg / ml (= 125 ng)双链DNA d 光通过的液层厚度(cm )
ε摩尔吸光系数,(L
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