第三章 一般成分讲义.ppt

（二）、维生素A的比色法（GB12388—1990） 1．原理 维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生 素A的含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测 定其吸光度。 方法特点：适于VA含量较高的样品（5μg/g）；对于含量较低的样品，易受其它脂溶性物质的影响，不易比色测定；生成的蓝色物质很不稳定，比色测定必需要在6s之内完成，否则蓝色迅速消失，误差极大。 2．试剂 三氯甲烷 应不含分解物，否则会破坏维生素A。 ① 检查方法：三氯甲烷不稳定，放置后易受空气中氧的作用生成氯化氢和光气。检查时可取少量三氯甲烷置试管中加水少许振摇，使氯化氢溶到水层。加入几滴硝酸银溶液，如有白色沉淀即说明三氯甲烷中有分解产物。 ② 处理方法：试剂应先检验是否含有分解产物，如有，则应于分液漏斗中加水洗涤数次，加无水硫酸钠或氯化钙使之脱水，然后蒸馏。 3．操作步骤 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。 样品处理： 皂化法：皂化、提取、洗涤、浓缩（含量不高） 研磨法：研磨、提取、浓缩（含量高的样品 4．测定步骤 （1）标准系列的制备 （2）样品测定 注意： ⑴乙醚为萃取体系，易发生乳化，在提取、洗涤时不能用力过猛，若发生乳化，加入几滴乙醇破乳； ⑵ 所用的三氯甲烷中不应含有水分，因三氯化锑遇水出现沉淀，干扰比色； SbCL3+H2O→SbOCL↓+2HCL 加入一滴乙酸酐保证脱水； ⑶ 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器； ⑷ 三氯化锑腐蚀性强，不能粘在手上，遇水有白色沉淀，用过的仪器要用氯化氢浸泡后再清洗 ； ⑸ 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可以用三氟乙酸、三氯乙酸作显色剂。 （三）紫外分光光度法 ⒈ 原理 维生素A的异丙醇溶液在325nm波长下有最大的吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。 方法特点：灵敏度比比色法高，可测定维生素A含量低于5μg/g的样品。 缺点：在维生素A最大吸收波长325nm附近有许多其它化合物也有吸收，干扰测定，所以本法适用于透明鱼油、维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪提取出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱层析除去干扰物。 (四) β－胡萝卜素的测定 食品中的胡萝卜素存在于植物、动物食品中、添加剂中。性质：对热、酸、碱稳定，对紫外线和O2敏感，易氧化破坏，溶于脂。 本身是一种色素，在450nm波长处有最大吸收，只要能分离完全，便可以定性、定量测定。但在植物体内，常与叶绿素、叶黄素等共存，因此，必须分开，常用方法有纸层析法、柱层析法、薄层层析。 ⒈ 纸层析原理 样品用有机溶剂丙酮、石油醚提取食物中的胡萝卜素和其他色素，通过皂化等处理除去其它干扰物如脂肪蛋白质等，浓缩后，在层析缸中以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其它色素分开。剪下含糊萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下进行比色测定。 （五）维生素D的测定 食品中Vd的含量一般很低，Va,Ve胆固醇含量往往很大，超过Vd，严重干扰Vd的测定，因此测定前必须经过柱层析除去这些干扰成分；本法测定的是VD2、VD3的总量。 ⒈ 三氯化锑比色法原理 在三氯甲烷中，维生素D与三氯化锑生成黄色化合物，在550nm波长处有最大吸收，呈色强度与维生素D含量成正比。 ⒉ 仪器：分光光度计、柱层析 3. 操作步骤 ⑴ 样品处理：皂化提取 ⑵ 纯化：①分离柱的制备：②纯化：用石油醚淋洗；收集淋洗液；用水洗涤淋洗液；脱水；然后浓缩、干燥，用5mL氯仿溶解； ⑶ 测定：①标准曲线的绘制：② 样品测定 二 水溶性维生素的测定方法 （一）维生素B1（硫胺素）的测定 又称抗神经炎素，常以游离态、或焦磷酸酯形式存在于自然界，在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。 性质：硫胺素为白色结晶，溶于水，微溶于乙醇，不易被氧化，比较耐热，特别是在酸性介质中相当稳定；在碱性介质中对热极不稳定，硫胺素在碱性介质中可被铁氰化钾氧化产生硫色素，在紫外光照射下产生蓝色荧光。 测定维生素B1的方法有荧光法和高效液相色谱法。 1．原理 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线下，噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其它荧光物质干扰时，此荧光强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素的量成正比。如样品中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胺素与杂质分离，然后以所得溶液做测定。 ⒉操作步骤 （1）试样处理:采样后匀浆处理； （2）提取 水解