高效液相色谱的维护与保养解决方案.pptVIP

高效液相色谱的维护与保养 液相色谱仪器的使用及保养 色谱泵的保养 流动相要过滤 常用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔 拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一种中间溶剂过渡. 例如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡 流动相的脱气 流动相脱气的目的 使色谱泵的输液准确 输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 保护色谱柱 减少死体积 防止填料的氧化 流动相脱气的方法 加热 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成的变化 抽真空 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果 超声波 简单，但效果不理想。 通惰性气体（一般用氦气） 可保持连续脱气，多用于低压梯度 在线脱气机 可保持连续脱气，多用于低压梯度 色谱泵的排气操作 使用前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按以下步骤排气： 将排液阀反时针转2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液 按以下方法之一将泵的后面放空 将U6K的C阀打开，或717设在PURGE状态 或，将参比阀打开 或，把色谱柱摘下 打开电源开关 开大流速到 6~9ml/min 同时用10ml注射器从排液阀注入流动相 直到泵后的流速稳定无气泡为止 色谱泵的运行 注意用外部控制器与用泵面板控制的区别 有些型号的外部控制器与面板不能同时用 如需要面板控制，需要断开控制线或关闭控制器 排气后的色谱泵即可运行 注意∶ 排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 如需要，恢复排气时断开的控制线 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值 液相色谱对流动相的要求 除色谱柱对流动相的要求外，还有∶ 与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度 防止细菌的生长 流动相的保存 有机溶剂流动相: 室温下密封,避光保存 缓冲盐流动相: 当日现配现用 低温下密封保存,一般不超过3天 防止长菌 有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相: 低温密封保存 防止有机相的挥发 选用适宜的容器 保存于聚乙烯瓶中的超纯水 保存于标准棕色玻璃瓶中的超纯水 检测器的保养 如长时间不用检测器可以关掉紫外灯 在4小时以上不用时，太频繁开关也不好 不要让缓冲液长期停滞在检测池内 用纯水冲洗 示差检测器及荧光检测器 注意流动池的耐压，不要在后面加压 关于自动进样器的针清洗 Purge Injector 与 Needle Wash 洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus的上部，应放于717plus同一水平面 洗针溶剂根据流动相的不同应有不同： 液相色谱系统的清洗与钝化 一般采用30％磷酸作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化 清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢 钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜 高效液相色谱的维护与保养 色谱柱的使用及保养 测柱效 – 良好的色谱实验习惯 拿到一根新色谱柱时，先测柱效 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件 定期检测柱效 定期检测仪器的谱带展宽 测柱效的方法 色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同 Waters的色谱柱均附有Use and Care说明书,可按说明书所述方法测定 以下是Waters反相C18柱的测定方法: 流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min 样品:50mg Acenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮 进样量5μl 检测波长:254nm 计算色谱柱的柱效 N 色谱柱的正确使用及操作 流动相的转换 特别是GPC柱 流速(压力)的变化幅度：0.1ml/min 凝胶柱（GPC及糖柱） 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求 色谱柱与仪器的联接 不同公司的色谱柱接头不同。处理不当时会造成严重后果： 色谱峰展宽（死体积）致使柱效下降或渗漏 解决办法： 自制相应的转换接头 使用“通用”型接头（锥箍及螺母） 这种锥箍在不锈钢管上是活动的，即stop-depth长度可调。因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。从Waters Phase Separations公司能得到一些PEEK工程塑料的接头,可用在各种类型的色谱柱上。 色谱柱的联接 各种锥箍和管路接头长度示意图: 色谱柱安装及连接的机械因素 色谱柱的在线保护装置 给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染 装置 在线过滤器 自装填料保护柱 预装保护柱 在线过滤器 In-Line Filter，部件号 WAT084560 防止颗粒在色谱柱头累积 优点：基本不影响柱效 在需要高柱效的分析时中常用（