转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究论文.docVIP

　　转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究论文 .freelent of cell line transfected an BTLA gene and preliminary study on its biological function Abstract AIM: To establish 293T cells expressing human BTLA gene, a novel attenuator for B and T lymphocyte. METHODS: The gene encoding human BTLA plified by RTPCR from PHA activated T cells, and then the target gene fragment after being digested H I. The rebinant vector ethods of MTT and cytometry. RESULTS: The stable expression of human BTLA on the transfected cell line etry analysis. In vitro, 293T/BTLA cells had an inhibitory effect on the proliferation of T cells stimulated by antiCD3 mAb and doarker CD25 on the surface of T cells and decreased the secretion of IFNγ and IL10. CONCLUSION: A cell line 293T/BTLA stably expressing the human BTLA protein has been obtained and it can partially inhibit the proliferation and activation of T cells in vitro. Keyphocyte; gene transfection; T cell; proliferation 摘 要 目的: 构建B、 T淋巴细胞衰减子（BTLA）基因转染的细胞作为免疫原, 并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能。方法: 通过RTPCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因, 经EcoR I和BamH I双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZTerm中构建成重组载体pEGZTerm/BTLA。用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞, 并用Zeocin抗生素进行长期筛选; 流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达; 通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果: 流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白。BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示, 与未转染的293T细胞相比, 该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体（mAb）刺激的T细胞增殖; 流式细胞术和ELISA法分析揭示, 该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFNγ和IL10 的分泌。结论: 获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株。该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用。 关键词B、 T淋巴细胞衰减子; 基因转染; T细胞; 增殖 B、 T淋巴细胞衰减子（B and T lymphocyte attenuator, BTLA）是2003年新发现的一个重要的负性共信号分子1, 属于CD28超家族成员。BTLA表达于外周血成熟的淋巴细胞（包括B细胞、 αβT、 δγT、 CD4+CD25+ T细胞）, 脾脏巨噬细胞和髓系树突状细胞（DCs）, 以及NK细胞呈微弱表达2。研究表明, BTLA对T细胞的活化、 增殖起着重要的负调控作用1-3。BTLA相应配体为TNFR超家族中的疱疹病毒入侵介质（HVEM）, 其表达于包括T细胞在内的多种免疫细胞表面5。HVEM的胞外段有4个富含半胱氨酸的结构域（CRD1, CRD2, CRD3和CRD4）, 其中CRD1可与BTLA结合从而介导负性信号3。有趣的是, HVEM同时又可作为LIGHT（homologous to lymphotoxins, inducible, petes phocyte）4的受体（LIGHT与HVEM的CRD2和CRD3结合5）介导正性信号。BTLA/HVEM/LIGHT这种复杂的相互作用可能有助于实现T细胞的精确调控和适度活化, 因此, 探