牛杀菌通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的.PDF

生 物 工 程 学 报 姚楠 等/牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响 195 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn February 25, 2015, 31(2): 195−205 DOI: 10.13345/j.cjb.140207 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 动物及兽医生物技术 牛杀菌/ 通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因 子表达的影响 1,2,4* 1,3* 1 1 2 1 姚楠 ，白杰 ，张雪梅 ，张宁 ，吴卫东 ，李文蓉 1 农业部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室 新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室 新疆维吾尔自治 区畜牧科学院生物技术研究中心，新疆 乌鲁木齐 830000 2 新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心，新疆 乌鲁木齐 830000 3 河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南 郑州 450002 4 新疆维吾尔自治区克拉玛依市人民医院，新疆 克拉玛依 834000 姚楠, 白杰, 张雪梅, 等. 牛杀菌/ 通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响. 生物工程学报, 2015, 31(2): 195 Yao N, Bai J, Zhang XM, et al. Effects on the expression of lipopolysaccharide-induced inflammatory cytokines mediated by bovine bactericidal/permeability-increasing protein. Chin J Biotech, 2015, 31(2): 195 摘 要: 杀菌/通透性增加蛋白 (Bactericidal/permeability-increasing protein, BPI) 能结合并特异地中和来自革 兰氏阴性菌外膜的脂多糖 (Lipopolysaccharide, LPS) 。为了研究牛源BPI 蛋白及其 N 端结构域在LPS 介导的 免疫应答中的作用，本文将BPI 全长 1 449 bp 编码区序列 (BPI) 和其N 端714 bp 的编码区序列 (BPI714) 分 别导入mHEK293 细胞，分析了稳定表达的BPI 或BPI714 对LPS 介导的炎性细胞因子表达的影响。首先将构 建的 pLEX-BPI/pLEX-BPI714 载体分别转染 mHEK293 细胞，获得稳定表达牛源BPI 或 BPI714 的mHEK293 细胞；然后用LPS 刺激上述细胞，分别收集刺激前、刺激后 1 h、3 h 、6 h 、12 h、24 h 、36 h 和48 h 的细胞， 并同时收集未表达BPI 或BPI714 的 mHEK293 细胞在各时间点的样品作为对照；采用定量RT-PCR 检测上述 细胞中炎性细胞因子IL-8 、IL-1β、TNF-α、NF-κB-1 、NF-κB-2 的相对表达水平，比较LPS 刺激前后表达BPI/BPI714 和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律。研究表明，LPS 刺激后，对照细胞中IL-8 、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2 表达水平在不同时间点均显著提高 (P0.05) ，并呈现规律性变化；而稳定表达BPI/BPI714 的细胞在同样刺激 条件下，IL-8 、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2 基因的转录水平均未发生显著变化 (P0.05) 。根据我们的实验结果， 在mHKE293 细胞模型中BPI 或BPI714 均能显著降低LPS 介导的炎性细胞因子表达，抑制LPS 介导的免疫应 答。这不仅为进一步研究 BPI 抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据，也为分析抗菌蛋白的抗