植物组织培养技术（高教版）电子教案：主要经济植物组织培养技术.docVIP

第2章 植物组织培养技术 第六节 主要经济植物组织培养技术 一、授课章节 二、学时安排 2学时 三、教学目标 1．通过菊花组培技术的学习，掌握草本花卉的组培快繁技术。 2．通过蝴蝶兰和大花蕙兰组培技术的学习，掌握兰科花卉的组培快繁技术。 3．通过美国红栌组培技术的学习，掌握木本植物的组培快繁技术。 4．通过马铃薯组培脱毒技术的学习，进一步理解和掌握植物脱毒与快繁技术。 四、教学重点、难点分析 重点： 各种植物的培养程序。 难点： 增殖与继代培养。 五、教具 电化教学设备 六、教学方法 讲授法，。 、教学过程 Ⅰ导入 本次课要介绍的是。II.新课 （二）培养程序 1.外植体的选择与处理 用于快繁的外植体最好采用茎尖或侧芽，其次是花序轴。 选取无病虫害，粗壮的茎尖和茎段。以花序轴为外植体时，选取具有该品种典型特征的，饱满壮实的花蕾，最好是将要开放而没有开放的花蕾。 处理时茎尖的嫩叶不要剥得太干净，以免伤口面暴露太大，使茎尖受到过大的损害；茎段除去叶，留一段叶柄；花蕾留下一小段花柄，便于夹取。 2.外植体的清洗、灭菌与接种 材料初步切割后，用洗衣粉水漂洗，再用自来水冲净后，在超净工作台上将其放入70%~75%的酒精中浸润30s，转入2%次氯酸钠溶液中消毒8～15min，并不时摇动，最后于无菌水中漂洗3～5次后待用。将茎段两端的切口再切去一小段，这样可减少灭菌药物的毒害。切除茎尖上的幼叶；若是花蕾须剥去花被，露出里面半球形的花序轴，再视其大小纵切成4～6块，接种到诱导培养基中。接种时按材料生长极性的上下端，正放在培养基上。 3.培养基及培养条件 适用于菊花的培养基种类很多，如MS、B5、N6、White 4.初代培养 外植体经培养后，一般10～20d茎尖处可分生出新芽，茎段的叶腋处也会萌发出新芽。而花蕾外植体经过15～20d的培养，会形成愈伤组织；再经过20～30d的培养，愈伤组织就会分化出较多的丛生芽。 5.增殖与继代培养 将从以上外植体诱导分化出的单芽或丛生芽，分切成数段或数块放入增殖培养基中继代培养。开始分化率和分化苗的数量都较小，随继代次数增加，分生苗很快就能够增多起来。 增殖的方式除诱导丛生芽增殖外，还可用茎切段作微型扦插来繁殖，它的增殖速度也完全能满足快速繁殖的要求。方法是用产生的嫩茎为材料，培养其长到一定高度时，将嫩梢剪成1节带1叶的茎段，然后插入MS或MS+NAA0.1 mg/L的培养基中培养，4～5周后，腋芽即生长成小植株，再照上述方法切剪茎段，重复培养，从而达到快繁的目的。 6.生根和移栽 菊花无根苗生根一般较容易，通常在增殖培养时久不转瓶，即可生根，但这种根的根毛较少或无，不利于将来移栽和生长，所以常用下列方法处理：一是无根苗的试管生根，切取3cm左右无根嫩茎，转插到1／2MS+NAA(或IBA)0.05mg/L的培养基中，经10d左右即可生根，然后移栽驯化。二是无根嫩茎直接插植到基质中生根。利用菊花嫩茎易于生根的特点，可免去试管生根一道工序。剪取2～3cm无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，l0d后生根率可达95％～100％。 7.出瓶苗的过渡管理 菊花的有根苗移栽成活容易，将有根的植株从瓶中用镊子轻轻夹出，洗净根部黏附的琼脂，栽入蛭石基质中。然后加设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和基质含水量，转为正常苗的管理阶段。移栽前期将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在20～26℃，就可使试管苗在20d左右移栽成活，并长出新根新叶。 二、蝴蝶兰的组织培养技术 （一）培养意义 蝴蝶兰属于兰科、蝴蝶兰属，为多年生热带花卉，是世界上栽培最广泛、最受喜爱的洋兰之一。 蝴蝶兰的繁殖大多采用分株的方法，得到种苗量少，不能满足栽培的需求。通过组织培养技术繁育蝴蝶兰种苗，实现“兰花工业”是目前繁殖率最高、种苗质量最优秀的方法。 （二）培养程序 1.外植体的选择 蝴蝶兰的组织培养外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等，各部位都能诱导成功，只是难易程度不一。 蝴蝶兰是单茎性热带气生兰，只有一个茎尖，如果直接从开花植株取得茎尖或茎段，整株造成浪费。以叶片或根尖作外植体，材料丰富，但诱导周期长、难度大；用花梗腋芽或花梗节间作外植体，容易诱导，外植体表面灭菌成功率高，是最合适的外植体取样部位。 2.外植体的处理、接种与初代培养 ●花梗腋芽的培养：蝴蝶兰为总状花序，近顶端的节着生花蕾，近基部的几个节，常具有苞叶覆盖的腋芽。剪取整枝花梗，清水冲洗30min，将花梗剪成长约2～3cm带腋芽的切段，用无菌吸水纸或纱布吸干水分，带入无菌操作室按无菌操作程序进行接种。先用70%的酒精溶液浸泡30s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8～10min，用无菌