果蝇cullin1基因dsrna设计及rnai效率检测.pdfVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　２０１７（０６上）：２３５－２３８ ＤＯＩ：１０．１３８８１／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｌｊｘｍｓｙ００２　网络出版时间：２０１６－１０－１４１１：５８ ＵＲＩ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２３．１２０５．Ｓ１１５８．００２．ｈｔｍｌ（优先数字出版） 果蝇Ｃｕｌｌｉｎ１基因ｄｓＲＮＡ设计及 ＲＮＡｉ效率检测 白广栋，王红岩，王梦竹，杨　雪，李明月，何倩毓 （黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆 １６３３１９） ＋ 中图分类号：Ｓ８５２．７４３；Ｑ７８６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－７０３４（２０１７）０６－０２３５－０４ 关键词：果蝇；Ｃｕｌｌｉｎ１基因；ｄｓＲＮＡ；ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）；Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ 摘　要：为了便于研究果蝇中Ｃｕｌｌｉｎ１基因的功能，试验采用ＰＣＲ和体外转录的方法针对Ｃｕｌｌｉｎ１基因 ５′ＵＴＲ和 ＣＤＳ区域分别合成对应的ｄｓＲＮＡ，并利用ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉ）以及 Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ等方法， 检测了５′ＵＴＲ和 ＣＤＳ区域的ＲＮＡｉ效率。结果表明：针对 Ｃｕｌｌｉｎ１基因５′ＵＴＲ和 ＣＤＳ区域设计的 ｄｓＲＮＡ均有效果，且二者间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。 ＤｅｓｉｇｎｏｆｔｈｅｄｓＲＮＡｓｆｏｒＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＣｕｌｌｉｎ１ｇｅｎｅａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＲＮＡｉｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ＢＡＩＧｕａｎｇｄｏｎｇ，ＷＡＮＧＨｏｎｇｙａｎ，ＷＡＮＧＭｅｎｇｚｈｕ，ＹＡＮＧＸｕｅ，ＬＩＭｉｎｇｙｕｅ，ＨＥＱｉａｎｙｕ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ１６３３１９，Ｃｈｉｎａ） Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ；Ｃｕｌｌｉｎ１ｇｅｎｅ；ｄｓＲＮＡ；ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（ＲＮＡｉ）；Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｆａｃｉｌｉｔａｔｅｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＣｕｌｌｉｎ１ｇｅｎｅｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ，ｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｄｓＲＮＡｓｆｏｒｔｈｅ５′ＵＴＲａｎｄＣＤＳｒｅｇｉｏｎｓｏｆｔｈｅ Ｃｕｌｌｉｎ１ｇｅｎｅｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ（ＲＮＡｉ）ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｏｆｔｈｅ５′ ＵＴＲａｎｄＣＤＳｒｅｇｉｏｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇＲＮＡｉ，Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲａｎｄｓｏｏｎ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｓＲＮＡｓｄｅｓｉｇｎｅｄｆｏｒｔｈｅ５′ＵＴＲａｎｄ ＣＤＳｒｅｇｉｏｎｓｗｏｒｋｅｄｗｅｌｌ，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）ｉｎｔｈｅＲＮＡｉｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅ５′ＵＴＲａｎｄＣＤＳｒｅｇｉｏｎｓ． 　　Ｃｕｌｌｉｎ－ＲＩＮＧＥ３Ｌｉｇａｓｅ（ＣＲＬ）是泛素－蛋白酶 收稿日期：２０１６－０７－０４；修回日期：２０１６－０９－０９ 体降解系统中最关键的一类Ｅ３泛素连接酶复合体， 基金项目：国家自然科学基金项目；黑龙江八一农 负责生物体内绝大部分蛋白的泛素化降解。ＣＲＬ复 垦大学学成、引进人才科研启动项目（ＸＹＢ２０１５－０７）；黑龙江 合体一般是由Ｃｕｌｌｉｎ骨架蛋白、含有ＲＩＮＧ结构域的 八一农垦大学大学生创新创业项目（ＸＣ２０１５０１８） 作者简介：白广栋