第三章 酶分离纯化.pptVIP

第三章：酶的分离纯化;要点：;3.1 酶分离纯化流程;3.2 酶纯度的评价;3.2.1 酶总活力回收率与提纯倍数;示例：;3.2.2 酶的纯度检验;常用的检验酶纯度的方法;3.3分离与纯化;3.3.1 细胞破碎的方法;3.3.2酶提取的方法;3.3.3影响酶提取的主要因素;1　分离过程中新设备、新技术的应用会取得事半功倍的效果。如离心机、过滤机的选择。采用膜分离技术等。 2. 浓缩与干燥过程尽量使用低温过程减少酶失活，同时可添加一些保护剂以减少酶失活。;3.4 沉淀分离;3.5 离心分离;3.5.1 离心机的种类和用途;常速离心机;高速离心机;超速离心机;;沉降系数;3.5.2 离心方法的选择p82;1、差速离心;2、密度梯度离心p82;密度梯度系统;3、等密度梯度离心p83;3.5.3 离心条件的确定;3.6 电泳;电泳仪;3.6.1 凝胶电泳;1 不连续凝胶电泳;2、SDS-凝胶电泳;3.6.2 等电聚焦电泳;特点;载体两性电解质要求p107;等电聚焦电泳槽;3.6.3 毛细管电泳;;主要优点;可靠性.由于此方法不使用固体物质,排除了毛细管老化的可能性,同时不与样品发生任何物理化学反应,从而避免了毛细管的经常性损耗,降低了毛细管电泳仪的成本。 时间短,价格低廉。毛细电泳的高效分离,使样品的准备工作降到最低程度,节省了试剂的消耗。同时,由于在毛细管中直接进行检测,致使分析时间缩短为10-15分钟。 ;3.7 　酶的结晶;常用的结晶方法：;透析平衡法;3.8　浓缩与干燥;一．浓缩 ;真空蒸发器;薄膜蒸发器;二．干燥 :获得含水少的固体