实验三、血液葡萄糖测定.ppt

实验七 血液葡萄糖的测定 （福林-吴宪氏法）;吴宪的科学贡献;二、实验原理; 钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。 血糖管的使用： 血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。;钨酸法 ;方法与步骤： ①取50ml锥形瓶1只，加入蒸馏水7份；②用奥氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，将吸管插人锥形瓶中水的底部，缓慢地放出血液。放完血液后，将吸管提高吸取上清液再吹人，反复洗管3次。充分混合，使红细胞完全溶解； ③加入1/3mol／L硫酸溶液1份，随加随摇，充分混匀。此时血液由鲜红变成棕色，静置5～10min，使其酸化完全；④加入10％钨酸钠溶液1份，边加边摇，血液由透明变成凝块状。当振摇到不再产生泡沫为止；⑤放置数分钟后用定量滤纸过滤或离心除去沉淀，即得完全澄清的无蛋白血滤液，供测定用。 用此法制得的无蛋白血滤液为10倍稀释的血滤液。即每毫升血滤液相当于全血0.ml，适用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的测定。;三、实验步骤;2、按表操作;3、比色测定;五、结果计算;1、分光光度计的原理;用公式表示为： T = I／I0 则 A = lg（1／T） =Kbc 式中 T — 透光率 I — 透过光强度 I0 — 入射光强度 A — 吸光度 K — 比例常数 b — 溶液的厚度 c — 溶液的浓度 ;7200分光光度计;1.光源： 是一种可以发射出供溶液或吸收物质选择性吸收的光。光源光强度应大，有良好的稳定性，在整个光谱区域内光的强度不应随波长有明显的变化。 2.单色器： 将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随意改变波长的一种分光部件，包括入口狭缝、色散元件、出口狭缝和准直镜四部分组成。 3. 吸收池： 又称为比色皿或比色杯等。常用吸收池是用无色透明、耐腐蚀的玻璃或石英材料制成，前者用于可见光区，后者用于紫外光区，吸收池光程0.1~10cm不等，其中以1cm为最多。 4.检测器： 检测器的作用是检测通过溶液后的光强度、并把光信号转变成电信号。常见的检测器有硒光电池、光电管和光电倍增管，后二者主要用于分光光度计。 5.指示器： 常用仪器指示器有光点检流计、微安表、记录器和数字显示器等。光点检流计和微安表指示器的标尺上刻有百分透光度（T%）和吸光度A。;7200型分光光度计使用方法;?容积;2．校正 校具(黑体)校“0.000”：将%T校具(黑体)置入光路，在T方式下按“%T”键，此时仪器自动校正后显示0.000  参比液校“100”%（T）或“0.000”（A）：将参比液拉入光路中，按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时仪器显示“BLA”，表示仪器正在自动校正，校正完毕后显示“100”%T或“0.000”A后，表示校正完毕，可以进行样品测定。;该模式下使空白试样透光率100%;该模式下使空白试样吸光度为0.000;3.测定 ?将两样品液分别拉入光路中,此时若在“T”方式下则可依次显示样品的透射比(透光度)若在“A”方式下，则显示测得的样品吸光度。 4．结束 测量完毕，关闭电源，将各调节旋钮恢复至初始位置。取出吸收池，维持其干净，不能有液体。比色皿洗净，晾干，存于专用盒内。;5.注意事项：; 比色皿与分光光度计应配套使用,否则会引起较大的实验误差.?比色皿不能单个调换 预热是保证仪器准确稳定的重要步骤. 比色皿内盛液应为其容量的2/3,过少会影响实验结果,过多易在测量过程中外溢,污染仪器.?比色皿中试样装入量应为2/3～3/4之间 拿放比色皿时,应持其毛面,杜绝接触光路通过的光面.如比色皿外表面有液体,应用绸布拭干,以保证光路通过时不受影响. 若待测液浓度过大,应选用短光径的比色皿,一般应使吸光度读数处于0.1～0.8范围内为宜.由于测定空白,标准和待测溶液时使用同样光径的比色皿,故不必考虑因光径变化而引起的影响. 被测溶液中不能有气泡、悬浮物等，否则也将影响测试精度。