小鼠真菌性角膜炎的拉曼光谱分析及真菌毒素检测.pdfVIP

目录 中文摘要4 英文摘要 5 缩略词对照表 7 第一部分 小鼠真菌性角膜炎角膜组织中拉曼光谱的研究 8 1.前言 8 2.材料与方法 9 3. 统计学分析 12 4. 实验结果 12 5. 讨论20 6. 结论23 第二部分 小鼠真菌性角膜炎中真菌毒素的检测24 1. 前言24 2. 材料与方法24 3. 结果与讨论29 4. 展望42 5. 结论44 参考文献45 致谢47 综述49 参 考 文 献 53 3 万方数据 小鼠真菌性角膜炎的拉曼光谱分析及真菌毒素检测 【摘要】:目的:建立小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型后，观察在真菌性角膜炎(fungal keratitis, FK)病变发展中角膜组织中生化物质及真菌毒素的表达情况，以进一步 探讨FK 的发生、发展机制。方法：按照随机数表法将BALB/C 小鼠分成2 组： 一组为真菌感染组 （即实验组）：另一组为损伤对照组 （即对照组）。两组均采用 “改良角膜表面镜片法”造模。在真菌感染后第 1、3、5、7、12 天采用半定量 方法分别对角膜的临床表现进行评分，并对角膜刮片物行病原学检查。同时在相 应时间点取下小鼠实验眼角膜，用拉曼光谱分析离体角膜在相应病程中生化物质 组成的变化情况。采用高效液相色谱串联质谱法检测镰刀菌酸(FA) 、伏马菌素 B1(FB1)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)4 种真菌毒素在不同 病程中的感染角膜组织中的表达。结果：1. 实验组小鼠角膜均成功感染接种的 真菌，具有典型的FK 临床表现。在真菌感染早期，角膜表现为弥漫性炎症反应， 随后浸润混浊加重，第3 天角膜呈灰白色混浊，第5 天时角膜溃疡灶扩大，表面 干燥、略隆起，新生血管从周边角膜开始长入，第7 天时病变好转，溃疡灶面积 缩小，第 12 天时病变稳定，角膜病灶瘢痕化，角膜呈白斑。临床评分情况：除 感染后第3 天与第7 天的临床评分差异无统计学意义外，其余各时间点评分差异 均有统计学意义（P0.05 ）。2. 拉曼光谱分析结果：正常角膜与实验组第1 天病 - 1 - 1 变角膜相比853cm （归属于酪氨酸）和940cm （归属于脯氨酸、缬氨酸）处的 谱峰强度差别不大，但在FK 第3 天时这两个峰的强度出现下降，FK 第5 天和 第7 天这两个峰的强度与FK 第3 天相比虽然变化不大但均比正常及FK 第1 天 - 1 强度低。在正常角膜和FK 病程第1 天的角膜组织中可发现有1244cm （归属于 胶原）处的谱峰，但在 FK 病程第 3、5、7 天均未发现有该处谱峰的存在。在 - 1 1448cm （归属于磷脂质）处的拉曼