水葫芦内生细菌的分离和鉴定论文.pdfVIP

中国环境科学学会学术年会优秀论文集(2006) 水葫芦内生细菌的分离和鉴定 杜文琴马丽娜刘 建黄素芳刘 波 (福建省农科院生物技术研究所福州350003) 摘要本研究采用MIDI一气相色谱鉴定系统，将从水葫芦上分离到的内生细菌进行鉴定，共鉴定 出6株水葫芦内生菌。 关键词水葫芦 内生菌MIDI一气相色谱鉴定系统、 水葫芦[Eichhorniacras$ipe8]又称风眼莲、假水仙、洋水仙等，是单子叶植物，雨久花科风 眼兰属。它原产于南美，于20世纪30年代传人我国，60、70年代曾作为畜禽饲料推广，但近 年来由于其营养价值不高和饲料的普及而逸为野生，又因内河、内湖水体的富营养化，其生长速 度近乎疯狂，长期无人打捞而腐败变质污染了水质，使之成为农业环保的头号敌人，现已被列为 世界十大害草之一，成为一大公害。作为目前世界上危害最严重的多年生水生杂草之一，该植物 已在我国17个省市自治区泛滥成灾。它侵占水库、湖泊，堵塞河道、沟渠，为蚊蝇的滋生和繁 殖提供良好的环境，严重危害农业发展、水上运输和人类健康。同时，水葫芦导致生态破坏和生 物污染：生长难以控制，对生态系统造成不可逆转的破坏，导致大量水生动植物的死亡；导致生 物多样性的丧失、生态灾害频发，对农林业造成严重的损失。我国每年因此遭受的损失约为100 亿元。 一、试验方法 1．仪器和材料 (1)气相色谱仪(Agilent6890) (3)脂肪酸提取前处理试剂： 45 [试剂1]NaOH g 甲醇(HPLCgrade) 150ml 去离子蒸馏水 150ml 水和甲醇混合后加入NaOH中，同时搅拌至完全溶解 [试剂2]6．00N盐酸 25ml， 甲醇(HPLCgrade) 275ml 把盐酸加入到甲醇中，并不断搅拌 [试，伯j]正己烷(HPLCGrade)200ml MTBE(HPLCGrade) 200ml 把MTBE加入到正己烷中，并搅拌均匀 [试剂4]‘NaOH 10．89 去离子蒸馏水 900ml (4)主要仪器：脂肪酸细菌鉴定仪 2．实验方法 ：’ (1)内生细菌的分离 取新鲜水葫芦茎叶，70％酒精消毒30s，升汞消毒3min，再用无菌水清洗3遍，移入研钵， 第七章其他相关领域研究进展 研钵内加入lml无菌水，研碎，取20斗l清洗后的水，于肉汁胨培养基(．A)上涂布培养，共涂 布3板，30士1．5。C培养。 (2)细菌的纯化 培养24h后，分别将平板中不同的菌，挑人不同 QuadrartlStreak乳c^nJfgu8 的NA平板中进行划线培养。培养24h后，再纯化培养 一次。 (3)细菌的纯培养 分别将纯化后的每一株菌，采用右图所示的方法 在TSB平板上划线培养。培养皿的建议画线法：采用 四区画线法，如右图。在此模式中希望达到四区不同 密度的菌体去确认是否纯化，我们的获菌区为第三区， 因此区必须有菌落并且量要多。 (4)脂肪酸鉴定的前处理 脂肪酸鉴定的前处理工作主要为脂肪酸的提取，大体分为5个步骤，每个步骤的目的见表1。 表1脂肪酸提取步骤 步骤 目 的 从培养皿中移出细菌 获菌(Harvesting) 皂化(Saponification)强烈的甲醇随着加热杀菌及溶解细菌 甲基化(Methylation)甲基化转换脂肪酸成甲基酯脂肪酸以增加脂肪酸的挥发性以供GC分析 萃取(Extraction)甲