湖北五峰土家族妇女HPV16型E7抗原限制性CTL表位的初步研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 初步研究湖北五峰土家族妇女人乳头瘤病毒16 型E7 抗原限制性细胞毒性T 淋巴细胞表位，为该地区远期表位抗原的特异性鉴定和临床研究提供靶肽。 方法： 使用NetMHCpan 软件预测HPV16 型E7 抗原CTL 表位，采用标准的Fmoc 方案合成多肽，产物采用RP-HPLC 纯化、分析，并进行质谱分析鉴定；选取湖 北五峰县土家族健康妇女和原发性宫颈癌各30 名并提取外周血DNA，使用按照 优诺基 HLA-SSO 流式荧光微珠基因分型试剂盒进行 HLA 分型，筛选出 + + HLA-A*02 健康妇女和 HLA-B*07 宫颈癌患者各 5 名，采集外周血单个核细胞 （PBMCs ）用E7 肽体外刺激进行免疫学实验，采用ELISOT 技术检测IFN-γ 斑 点形成细胞数（Spots Forming Cells，SFCs）水平的差异并进行统计学分析。 结果 经RP-HPLC 纯化后，多肽产物纯度均在95% 以上，采用质谱法鉴定出多肽 实测分子量与理论值相吻合，鉴定为高纯度的目标肽。 + E7 肽体外刺激 HLA-A*02 健康人PBMCs 诱导机体产生了显著的CTLs 反 应，IFN-γ 斑点形成细胞数目明显。组间差异用方差分析，组间差异有统计学意 义（F=15.17 ，P ＜0.001 ），两两比较进行LSD 检验，与阴性对照组比较，实验 组差异均有统计学意义，其中以P2 :E741-55 、P4:E751-65 差异最显著（P ＜0.05 ）， 二者无显著性差异。 + E7 肽体外刺激 HLA-B*07 宫颈癌患者 PBMCs 未能诱导机体产生显著的 CTLs 反应，INF-γ 斑点形成细胞数目少，组间差异用方差分析，组间差异有统 计学意义（F=40.26 ，P ＜0.001 ），两两比较进行LSD 检验，与阴性对照组比较， 以P5 ：E766-80 差异最显著，且有统计学意义（P ＜0.05 ）。 + + HLA-A*02 健康人与HLA-B*07 宫颈癌患者ELISPOT 结果提示INF-r 斑点 形成细胞数目有明显差异，且差异性有统计学意义（F=268.82 ，P ＜0.001 ）。 对不同多肽诱导机体产生 CTLs 反应结果进行 SNK 检验，P2:E741-55 、 P4:E751-65 和P5:E766-80 三条多肽对结果的影响最明显，与其他多肽比较差异有统 II 万方数据 摘要 计学意义（P0.05 ），但三者间尚不能认为有统计学差异。 结论： HLA-A*02 能有效呈递HPV16 型E7 抗原肽诱导机体产生显著性CTLs 反应； HLA-B*07 不能有效呈递HPV16 型E7 抗原肽诱导机体产生显著性CTLs 反应； E741-55 及E751-65 具有较强抗原性，初步筛选为HLA-A*02 限制性CTL 候选表位 肽。 关键词：五峰县，人乳头瘤病毒，E7 抗原，表位 III 万方数据