组织芯片研究ERp29在胃癌中的表达及意义.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………..………………………………………… 4 英文摘要…………………………..………………………………………… 6 正文 前言…………………………..………………………………………… 8 第一部分 ERp29 在胃癌低表达的验证及其临床意义 材料和方法…………………..………………………………….. 9 结果…………………..………………………………………….. 19 讨论…………………..………………………………………….. 26 第二部分 ERp29 过表达载体的构建 材料和方法…………………..………………………………….. 29 结果…………………..………………………………………….. 36 讨论…………………..………………………………………….. 38 小结……………..……………………………………………….……. 39 参考文献……………..…………………………………………...…… 40 附录 （英文缩略词表、试剂配方）……….. ………………………. 43 致谢…………………………………………………………………… 49 论文综述 ERp29 与肿瘤发生发展的关系………………………………….. 50 参考文献…………………………………………… 54 3 万方数据 组织芯片研究ERp29 在胃癌中的表达及意义 摘要 目的：课题组前期通过双向电泳和质谱鉴定分离出在胃癌和癌旁正常黏膜组织有 差异表达的蛋白质70 种，其中43 种蛋白质在胃癌中表达下降，其余27 种 蛋白质在胃癌中表达上升。本实验选择在胃癌中表达下降的 ERp29 蛋白进 行进一步研究，旨在验证 ERp29 在胃癌组织中的低表达并探讨其表达与各 临床病理参数之间的关系及其临床意义，并构建 ERp29 过表达载体，为后 续的研究提供实验基础。 方法：实验第一部分首先通过Western-blot 及RT-PCR 初步在蛋白质及mRNA 水 平检测ERp29 在 8 对胃癌组织及相对应癌旁正常黏膜组织的表达情况。然 后应用组织芯片技术结合免疫组化法对 170 对胃癌组织和癌旁正常黏膜组 织中ERp29 的表达水平进行检测，并分析其表达与年龄、性别、浸润深度、 浆膜浸润、TNM 分期、淋巴结转移、分化程度、血管侵犯、周围神经侵犯、 组织学分型、肿瘤大小、远处转移及腹膜种植等临床病理之间的关系。 实验第二部分运用基因克隆技术将 ERp29 的基因序列克隆至 pcDNA3.1/Hygro （+ ）空载体中，构建ERp29-pcDNA3.1 过表达载体，经酶 切鉴定及测序鉴定正确后转染胃癌细胞 SGC7901