紫外线辐射诱导DNA损伤时Rock2磷酸化位点的鉴定及对肝癌细胞生物学活性影响的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 通过鉴定Rock2磷酸化位点来研究其对肝癌细胞生物学活性的影响，并明确 Rock2在肝癌发生发展过程中的作用。 方法： 1. 通过磷酸化位点预测软件以及生物信息学分析Rock2结构，并设计可能 发生磷酸化位点的磷酸化多肽。 2. 分别对HepG2细胞和MHCC97H细胞进行UV照射，通过Western Blot分析 Rock2可能发生磷酸化的位点。 3. 应用平板克隆形成实验和细胞凋亡实验，观察UV辐射诱导DNA损伤时， Rock2 磷酸化位点对肝癌细胞生物学活性的影响。 结果： 1. Rock2可能发生磷酸化的位点有：(1) S442 ; (2) S771; (3) T814 。 2. UV照射后，Rock2 的T814位点发生磷酸化。 3. UV照射后，MT-Rock2组的克隆形成率比WT-Rock2组低。 4. UV照射后，MT-Rock2组的细胞凋亡率比WT-Rock2组高。 结论： 1. UV 辐射诱导 DNA 损伤时，Rock2 的T814 位点发生磷酸化。 2. Rock2 的T814 位点磷酸化对 UV 造成的 DNA 损伤具有修复作用。 关键词：原发性肝细胞癌；Rock2 ；DNA 损伤；磷酸化；UV II 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: To study the effect of Rock2 on the biological activity of hepatoma cells through identification of its phosphorylation sites, and clarify the role of Rock2 in the occurrence and development process of liver cancer. Methods: 1. Analyze the structure of Rock2 by phosphorylation sites predict software and by bioinformatics analysis, and design phosphorylated polypeptides of the sites which may possibly occur phosphorylation. 2. HepG2 cells and MHCC97H cells are subjected to UV radiation, respectively, and then analyze the possible Rock2 phosphorylation sites by Western Blot analysis. 3. Apply colony and apoptosis experiments, to observe the effect of Rock2 T814 phosphorylation on the biological activity of hepatoma cells after DNA damage was induced by UV radiation. Result: 1. The sites of Rock2