二次双溶剂冷冻结晶法分离纯化橡胶籽油中α―亚麻酸探究.doc

二次双溶剂冷冻结晶法分离纯化橡胶籽油中α―亚麻酸探究 　　摘 要：以橡胶籽油为原材料，皂化得混合脂肪酸，经冷冻结晶得脂肪酸Ⅰ，最佳条件是通过低温结晶法从纯双橡胶溶剂中分离α-亚麻酸的响应面方法建立的。基于单因素实验，乙腈和丙酮/脂肪酸Ⅰ（v/m），乙腈/丙酮（v/ v），冷冻时间三因素，运用中心组合实验设计，考察了三因素之间相互作用。借助响应面法分析实验数据，结果表明：以乙腈和丙酮为混合溶剂，乙腈与丙酮/脂肪酸Ⅰ（v/m）为18：1，乙腈/丙酮（v/v）为1.5：1，冷冻时间为9h，固液分离方式为-18℃、7000r/min冷冻离心3min，橡胶籽油中α-亚麻酸含量最高达45.41%。与传统方法相比，此法提纯效率高，脂肪酸不易氧化，为α-亚麻酸的纯化提供了一种新的方法 关键词：橡胶籽油；二次双溶剂冷冻结晶法；α-亚麻酸；纯化 α-亚麻酸（18：3n-3）属ω-3系列多烯脂肪酸，是构成人体组织细胞的主要成分，机体不能合成、代谢，经转化可得人体必需的活性物质DHA和EPA[1]。α-亚麻酸不仅具有降低血脂、血压、血糖，抑制癌症发生与转移，抑制过敏反应，抑制衰老，抗炎，提高记忆力，还可用于治疗和预防心脑血管病痴呆症等疾病[2]。因此，开发利用天然的α-亚麻酸具有广泛的医疗应用前景。虽然改变溶剂对冷冻结晶效果较明显，但很少有人研究冷冻结晶次数对产物纯度的影响，本文通过增加冷冻结晶次数分离橡胶籽油中α-亚麻酸，了解了α-亚麻酸（ALA）、亚油酸（LA）和油酸（OA）在冷冻结晶过程中变化，考察了乙腈/丙酮、乙腈与丙酮/脂肪酸Ⅰ、冷冻时间对二次分离效果的影响，通过响应面分析得到最佳工艺条件 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 橡胶籽油：采用有机溶剂提取法从橡胶籽中提取；脂肪酸Ⅰ：混合脂肪酸经冷冻结晶预处理所得产物；脂肪酸Ⅱ：双溶剂冷冻结晶法所得产物；脂肪酸Ⅲ：二次双溶剂冷冻结晶法所得产物；丙酮、乙腈等试剂均为国产分析纯 ?子天平：EL303（0.001g），梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；旋转蒸发仪：RE-52系列，上海亚荣生化仪器厂；pH计：PHS-3C，上海精密科学仪器有限公司；冷冻高速离心机：设备型号为UNIVERSAL 32R，德国Hettich；超低温冰箱：Thermo Electron Corporation；Agilent 7890A GC：美国Agilent公司 1.2 混合脂肪酸的制备 采用皂化法制备混合脂肪酸（FFA） 1.3 脂肪酸Ⅰ的制备 采用冷冻结晶法制备脂肪酸Ⅰ 1.4 脂肪酸Ⅱ的制备 采用双溶剂冷冻结晶法制备脂肪酸Ⅱ 2 实验分析与结果 2.1 单因素试验 选取乙腈与丙酮溶剂/脂肪酸Ⅰ（v/m）、乙腈/丙酮（v/v）、冷冻时间三个因素对α-亚麻酸提纯率的影响进行单因素试验，以确定最佳提取条件 亚油酸和油酸含量随着溶剂量的增加而降低，α-亚麻酸含量随着溶剂量的增加而增加。当乙腈和丙酮溶剂/脂肪酸Ⅰ（v/m）为20：1时，达到最大，亚油酸含量和油酸含量最小。当乙腈和丙酮溶剂的量不断增加时，由于乙腈在-75℃会凝固，晶体逐渐升高，母液容易包裹在晶体孔结构中，导致母液和晶体难以完全分离，α-亚麻酸含量也随之下降。因此，乙腈与丙酮溶剂/脂肪酸I（v/m）的最佳比例为20：1。设定乙腈/丙酮（v/v）为1.5：1，冷冻时间为10h，考察不同乙腈与丙酮溶剂/脂肪酸Ⅰ（v/m）对分离效果的影响，亚油酸和油酸含量逐渐降低，α-亚麻酸含量随溶剂用量的增加而增加。当乙腈和丙酮溶剂/脂肪酸Ⅰ（v/m）为20：1时，亚油酸纯度达到最大，亚油酸含量和油酸含量降至最低。当乙腈和丙酮溶剂的量增加时，由于乙腈在-75℃会凝固，晶体逐渐升高，母液容易包裹在晶体孔结构中，导致母液和晶体难以完全分离，α-亚麻酸含量则有所下降 2.2 响应面法实验设计 2.2.1 响应面回归模型的建立 利用Design-Expert软件对表2数据进行多元回归拟合，得到相应的模型为： Y=45.20-1.55X1-1.17X2-0.086X3-1.67X1X2- 1.05X1X3+2.43X2X3-1.68X12-5.75X22-3.61X32 Y为α-亚麻酸的含量，%； X1为乙腈与丙酮/脂肪酸Ⅰ； X2为乙腈/丙酮； X3为冷冻时间，h 2.2.2 验证试验 α-亚麻酸的最佳分离条件如下：乙腈和丙酮/脂肪酸Ⅰ分别为17.68：1（v/m），乙腈/丙酮为1.49（v/v），冷冻时间为9.05h，α-亚麻酸含量为45.57%。丙酮和丙酮/脂肪酸Ⅰ分离α-亚麻酸与橡胶籽油的最佳条件为18：1（v/m），乙腈/丙酮为1.5：1（v/v）