第五章酶4研究.ppt

* * * * * * * 包埋法 吸附法 共价偶联法 ⊙ 交联法 ⊙ 固定化酶 Back 酶的改造（化学修饰）：功能基团的化学修饰酶 酶蛋白侧链的化学修饰 酶分子内或分子间的交联反应 酶的模拟：根据酶作用的原理，摸拟酶的活性中心和催化机理，用化学方法制备结构较简单、高效、高选择性、稳定性能好的新型催化剂，既可以是无机化合物，又可以是有机化合物或小肽。 酶的改造和模拟 Back 将催化侧链连接到环糊精上，可成功模拟胰凝乳蛋白酶 环糊精分子结构 人工模拟酶 ?-benzyme 底物 羟基 咪唑基 羧基 活性与天然酶相当，稳定性显著提高 Back 酶的蛋白质结构功能 新酶分子蓝图 选择性修饰方案 突变酶 新酶 克隆酶 产品 效用 发展 酶基因 遗传设计 遗传修饰 DNA重组技术 DNA重组技术 生物酶工程示意图 Back * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (七）、抑制剂对酶作用的影响 1 基本概念 ⊙ 2 抑制作用的类型 ⊙ 3 可逆抑制作用和不可逆抑制作用的鉴别 4 可逆抑制作用动力学 5 一些重要的抑制剂 Back 1 基本概念 失活（Inactivation） 抑制（Inhibition） 使酶蛋白变性而引起酶活力的丧失 酶的必需基团化学性质发生改变，但酶没有变性，而导致的酶活性的降低甚至丧失 变性剂 抑制剂 选择性 无 有 抑制程度的表示方法： 不加抑制剂时的反应速率为v0，加抑制剂后的速率为vi 相对（残余）活力分数（a） a = vi / v0 抑制分数（i） 指被抑制而失去活力的分数 i = 1 - a = 1 - vi / v0 Back 2 抑制作用的类型 酶的抑制作用 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 irreversible reversible 竞争性抑制 ⊙ 非竞争性抑制 ⊙ 反竞争性抑制 ⊙ competitive non-competitive un-competitive Back 非专一性 ⊙ 专一性 ⊙ 比较 ⊙ 可逆与不可逆抑制 抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失，能用物理方法如透析、超滤等除去抑制剂而使酶复活，抑制作用是可逆的。 抑制剂与酶的必需基团以共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活，抑制作用不可逆。 Back 抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶失活。 非专一性不可逆抑制剂 抑制剂类型 被抑制基团 酰化剂 烷化剂 还原剂和氧化剂 有机汞、有机磷 Back 这类抑制剂选择性很强，它只能专一性地与酶活性中心的某些基团不可逆结合，引起酶的活性丧失。 专一性不可逆抑制剂 酶 Enzyme Ser O 有机磷杀虫剂 X P O O R O R H Back 竞争性抑制作用 E S ES E P k1 k2 + + k3 + I EI 酶 酶 酶 底物 抑制剂 相同的结合位点 机制 动力学特征 ⊙ 实例 ⊙ Back ki ki = [E][I] / [EI] 竞争性抑制的动力学特征 v [S] 无 I 有 I Vmax Vmax 2 Km Km’ 1/v 1/[S] 有 I 无 I v = ——————— V [S] Km(1+[I ]/ki)+[S] [I] 增加 Back 竞争性抑制实例 磺胺药物的药用机理 H2N- -SO2NH2 对氨基苯磺酰胺（磺胺） H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 谷氨酸 蝶呤 叶酸 叶酸 嘌呤核苷酸的生物合成 细菌正常生长 人怎么办？ 吃！ Back 非竞争性抑制 E S ES E P k1 k2 + + k3 + I EI ki ki = [ES][I] / [ESI] + S + I ESI ki = [EI][S] / [ESI] 酶 酶 酶 机制 动力学特征 ⊙ Back v [S] 无 I 有 I Vmax Vmax 2 Vmax’ Vmax’ 2 Km Km’ = 1/v 1/[S] 有 I 无 I [I] 增加 非竞争性抑制的动力学特征 Back 反竞争性抑制 E S ES E P k1 k2 + + k3 + I ESI ki = [ES][I] / [ESI] ki 动力学特征 ⊙ Back v [S] 无 I 有 I Vmax Vmax 2 Vmax’ Vmax’ 2 Km Km’