从Raji细胞克隆IL-10基因.pdfVIP

安徽农业科学，J~nal ofAnhui AS,i．Sci．20O7，35(36)：11764—11765，11781 责任编辑 孙红忠 责任校对 李洪 从Raji细胞克隆IL-10基因 陈其新 ，劳风学2，李明 (1，河南农业大学，河南郑州 ；2．北京市医药器械学校，北京100o12) 摘要 [目的]探索一种简便可行的白细胞介素一10(IL广10)基因的克隆方法。[方法]以人Burkitt’s淋巴瘤细胞系mji细胞为材料，提取 培养的Raii细胞中的总RNA。根据GenBank中人Ⅱ，10基因序列设计1对特异性引物，用RT-PCR方法扩增人IL-10基因的编码eDNA。 回收目的片段，将其与I~D18-T载体连接并转化到大肠杆菌感受态细胞DH5a，构建该基因的重组质粒。重组质粒经 和双酶切鉴定 后进行测序。[结果]以骨髓细胞组织总RNA为模板进行RT-PCR，可从mji细胞中获得了预期的约550 bp特异性条带。成功构建了卫 l0基因的重组质粒，PER扩增和双酶切的鉴定结果说明该插入片段可能为IL-IO eDNA。从获得的阳性克隆中挑选1个茵落来分析重组 质粒的插入DNA片段序列。序列分析结果证实其与报道的IL-IO基因的序列一致。[结论