引入定量PCR TaKaRa.pptVIP

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引入定量PCR TaKaRa

* ;主 要 内 容;Real Time PCR基础知识;Real Time PCR的用途;Real Time PCR的原理;Real Time PCR的原理;Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧光信号值 达到设定的阈值时所经历的循环数。 ( C-代表Cycle,t-代表threshold) ; 在PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程, 最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。;生产厂商 ;LightCycler? 480 ;各公司Real Time PCR检测系统比较;Real Time PCR基础知识;;荧光染料嵌合法(SYBR Green I);;;;CycleavePCR法原理 ;;;主 要 内 容;One Step和Two Step RT-PCR的选择;;RT Primer的选择;;Total RNA中Genomic DNA混入的对策;;PCR Primer;Real Time PCR引物设计;两条引物的Tm值尽量接近,应用专用软件计算Tm值;RefSeq序列;LOCUS NM_008777 1959 bp mRNA linear ROD 15-APR-2005 DEFINITION Mus musculus phenylalanine hydroxylase (Pah), mRNA. ACCESSION NM_008777 VERSION NM_008777.1 GI:6679202 SOURCE Mus musculus (house mouse) ORGANISM Mus musculus FEATURES Location/Qualifiers gene 1..1959 /gene=Pah /db_xref=GeneID:18478 /db_xref=MGI:97473 CDS 48..1409 /gene=Pah /note=go_function: iron ion binding [goid 0005506] /protein_id=NP_032803.1 /db_xref=GI:6679203 /db_xref=GeneID:18478 /db_xref=MGI:97473 ORIGIN 1 aattcaaccc tgtgctaagc tagacacctc acttactgag agccagcatg gcagctgttg 61 tcctggagaa cggagtcctg agcagaaaac tctcagactt tgggcaggaa acaagttaca 121 tcgaagacaa ctccaatcaa aatggtgctg tatctctgat attctcactc aaagaggaag 181 ttggtgccct ggccaaggtc ctgcgcttat ttgaggagaa tgagatcaac ctgacacaca 241 ttgaatccag accttcccgt ttaaacaaag atgagtatga gtttttcacc tatctggata 301 agcgtagcaa gcccgtcctg ggcagcatca tcaagagcct gaggaacgac attggtgcca 361 ctgtccatga gctttcccga gacaaggaaa agaacacagt gccctggttc ccaaggacca 421 ttcaggagct ggacagattc gccaatcaga ttctcagcta tggagccgaa ctggatgcag 481 accacccagg ctttaaagat cctgtgtacc gggcgagacg aaagcagttt gctgacattg 541 cctacaacta ccgccatggg cagcccattc ctcgggtgga atacacagag gagga

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