【课件】细胞器蛋白的制备.pptVIP

细胞与细胞器蛋白的制备 细胞与细胞器蛋白质的制备 细胞及细胞器蛋白质的提取 意义： 在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的细胞组份就是细胞核、线粒体和细胞浆。 分离细胞核、线粒体和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的蛋白可以用于细胞信号转导通路方面的研究。 细胞及细胞器蛋白质的提取 1.细胞核蛋白质的提取 2.线粒体及细胞浆蛋白质的提取 2.线粒体及细胞浆蛋白质的提取 3.全细胞蛋白质的提取 注意事项 蛋白质纯化 意义： 随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种实验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学上游的工作往往并非最终目的，分子克隆与表达往往是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。 蛋白质纯化的一般原则 选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性。 柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。 各种蛋白纯化方法及其优缺点 离子交换色谱 离子交换色谱 离子交换色谱 离子交换色谱 亲和层析 亲和层析是一种层析技术，通过生物分子之间特异性的的相互作用分离生物分子. 原理：填料上的配基与生物大分子特异结合，用特殊的洗脱条件把