竹节人参中蛋白质提取工艺研究 .docVIP

　　竹节人参中蛋白质提取工艺研究 【摘要】 　　目的研究竹节人参蛋白质提取最佳生产工艺。方法采用单因素和L9（34）正交实验，以竹节人参蛋白质得率为指标，考察了氢氧化钠溶液的浓度、用量、提取时间和提取次数对提取效果的影响。结果氢氧化钠浓度为0.15 mol/L，用量为样品体积的20倍，提取时间1.5 h，提取 3 次为最佳工艺。结论 该工艺合理，重复性好，可为竹节蛋白质提取工艺的确定提供实验依据。 【关键词】 竹节人参 蛋白质 单因素递变 正交实验 工艺条件 　　Abstract:ObjectiveTo study the extraction process of protein from panax japonicus.MethodsUse orthogonal design L9（34）,and take the protein rate as the index，definite the best condition of protein process.ResultsThe best process condition ol/L Sodium hydroxide, 20 times amount of samples, the extraction time es.ConclusionThis process is the best and it can be used for extraction of Panax japonicus protein. 　　Key ent; Craft conditions 　　竹节人参属五加科植物，别名竹节三七、竹节参、白三七、北三七、大叶三七〔1～3〕。具有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰等功能，兼具我国北药人参和南药三七之功效，在民间有“草药之王”的美誉，属我国特有珍贵中药材资源。 　　湖北恩施是世界第一高硒地区〔4〕，生长于这一地区的竹节人参由于其富含硒而药效独特，疗效显著〔5〕，现已进行大规模的种植，资源十分丰富。现代药理学研究表明，竹节人参主要活性物质为皂苷类、多糖、氨基酸及少量的挥发性油等〔6〕。目前，在对竹节人参活性成分进行提取的同时，浪费了大量竹节人参的含硒有效成分。为了充分利用宝贵的富硒竹节人参资源，笔者选择了生长在高硒地区的竹节人参为研究对象，系统研究了竹节人参中各活性成分及有效成分的提取工艺，为综合利用竹节人参提供理论依据。本文旨在以超声提取皂苷后的残渣为原料，通过单因素和正交实验，探讨残渣中蛋白质最佳提取工艺。 　　1 器材与方法 　　1.1 材料 　　竹节人参由湖北省中药材研究所提供，为家种4年生的竹节人参根。在以甲醇为溶剂，超声提取竹节人参皂苷后的残渣为本实验的原料。 　　1.2 仪器 　　AVANTI30高速冷冻离心机(美国贝克曼公司)； S53/54全波长分光光度计。 　　1.3 实验方案设计 　　1.3.1 溶剂的选择控制样品与提取溶剂的体积约比为1∶20，分别用水，0.1 mol/L氯化钠溶液，0.1 mol/L的盐酸及0.1 mol/L氢氧化钠溶液作为溶剂于常温下进行提取，以蛋白质的得率为指标，选择最佳溶剂。 　　1.3.2 单因素实验本实验以溶剂的浓度、溶剂用量、提取时间及提取次数作为影响竹节人参蛋白质得率的单因素，设置各因素不同的水平，找出不同因素对蛋白质得率的影响规律。 　　1.3.3 正交实验以单因素实验的结果为参考，进行溶剂的浓度、溶剂用量、提取时间及提取次数4因素3水平正交实验设计方案，因素水平表（见表1）。以蛋白质的得率为指标，通过L9（34）正交实验确定最佳的提取条件。表1 正交设计因素水平（略） 　　1.4 样品处理提取竹节人参皂苷的残渣置鼓风干燥箱中60℃下烘干，密封置于干燥器中备用。 　　1.5 蛋白质的提取与分离分别用水、0.1 mol/L氯化钠溶液、0.1 mol/L的盐酸及0.1 mol/L氢氧化钠溶液作为溶剂，对样品中的蛋白质进行提取，得到相应的溶液即为水溶蛋白质、盐溶蛋白质、酸溶蛋白质及碱溶蛋白质。然后在水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白及碱溶蛋白的提取液中加入硫酸铵至饱和，4℃静置过夜，离心，取沉淀透析至透析液中加饱和氯化钡无沉淀生成时，再分别用蒸馏水、0.1 mol/L氯化钠、0.1 mol/L盐酸及0.1 mol/L氢氧化钠溶液充分溶解后定容，备用。 　　1.6 蛋白质得率的计算蛋白质得率η=100×(m1 /m2)，其中m1为从样品中所提取出的蛋白质的质量，m2为样品的质量。 　　1.7 测定方法蛋白质含量测定用考马斯亮蓝G-250显色，595 nm测吸光度值，用牛血清蛋白制作标准曲线，曲线回归方程Y=507.13X -0.076 4，相关性系数r=0.998 6。 　　2 结果 　　2.1 溶剂的选择在选