5 第五讲1 PCR技术的.pptVIP

聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction）;;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;PCR技术产生的历史背景;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本过程;PCR反应的基本要素 ;Template DNA;DNA Polymerase ; pfu DNA Polymerase 来源：是从Pyrococcus furiosis 中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶。 特点： ①它不具有5’→3’外切酶活性，但具有3’→5’外切酶活性，因而可纠正PCR 过程中产生的错误，使产物的碱基错配率极低； ②PCR产物为平端，无3’端突出的单A核苷酸，不能进行T-A克隆。; Vent DNA Polymerase 来源：从嗜热高温球菌(Thermococcus Litoralis)中分离出的。 特点： ①不具有5’→3’外切酶活性，但具有3’→5’外切酶活性，可以去除3’错配的碱基，具有校对功能； ②PCR产物为平端，无3’端突出的单A核苷酸，不能进行T-A克隆； ③PCR产物的扩增长度可达10kb以上。 ;Primers（引物）;primers ; InsuF 5-AATCAGCACCTATGTGGTTCTCAYYTNGTNGA-3’ InsuR 5-GCTGGTACAGAGAGCAGATGGAAKYRCARCAYTG-3 其中 Y= C/T N= A/T/C/G K= G/T R= A/G ;PCR引物设计的基本原则;PCR引物设计的基本原则;7 引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处； 8 引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。; 361 AAGGTATCACTAGAATGGCTATTAGCATTGGGTCCAAGCTTAGGAATTGCTCGAGTACCG 421 GGTATTGGTTTAGTTTTTACCGATCTCACCTCTGGAATCCCTGCCAACTTCTCTCGTTTT 481 GTCACTAACCTTCCTGCCTTCCATCGTGTCCTTGTCTTCGTGTGTGTAAAATCAGTACCT 541 GTTCCATTTGTGCCCCCAGCTGAGCGCTATCTTGTGGGCCGTGTGGGTCCGGCTGCTCAT 601 CGGTCTTATAGGTGCATTGTTCGTTATGGGTACCGAGATGTGCATCAGGATGTTGATTCT 661 TTTGAAATCGAGCTAGTTTCCAAACTGGCTGATTTCATTCACTATGATTGGCATCGAAGC 721 CAGCACAGTCCCCATTCTGAGGAGGATGTTTCCCACTCTAACGAATCAACAAGTGAATGT ;dNTPs ;Mg2+浓度　; PCR反应体系的基本成分 ; 常规PCR反应体系; PCR反应的平台期效应 在反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DN