肿瘤抗原负载DC激活的CTL对裸鼠移植瘤作用的研究 .docVIP

　　肿瘤抗原负载DC激活的CTL对裸鼠移植瘤作用的研究 王雪峰 ， 张莉，杜晓媛，梁雯，远洋 【摘要】 目的 研究负载人喉癌细胞系Hep-2冻融抗原的树突状细胞(DC)体外活化的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在裸鼠Hep-2移植瘤发生、发展中的作用。方法 以健康人外周血贴壁单核细胞体外诱导DC并负载Hep-2冻融抗原，经MTT法检测其激活的同基因型T淋巴细胞在体外对Hep-2的杀伤活性后，将此Hep-2特异性CTL预防性接种于裸鼠皮下(预防组6 只，对照组16 只),3 天后接种Hep-2，观察其移植瘤的发生率：再将此CTL分以1 次、2 次治疗性接种于已荷瘤裸鼠皮下(对照组6 只;治疗组和加强治疗组各5 只)，观察移植瘤的生长情况。结果 预防组Hep-2移植瘤的发生率明显低于对照组(预防组33%，对照组00%，P=0.0002);治疗组与加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于对照组(P0.05，P0.01)，且加强治疗组裸鼠荷瘤体积明显小于治疗组 (P0.05)。结论 负载Hep-2冻融抗原的DC活化的CTL不仅能预防裸鼠Hep-2移植瘤发生而且能抑制其移植瘤的生长。 【关键词】 树突状细胞;肿瘤免疫治疗;喉癌;裸鼠 　　Abstract： Objective To study the effect of the cytotoxic T lymphocyte (CTL)activated by dendritic cell (DC) loaded an laryngeal carcinoma cell line Hep-2 lysates on the Hep-2 implanted tumor occurrence and its groice.Methods In vitro DC onocyte isolated from human peripheral blood mononuclear cells and loaded Hep-2 tumor lysates. Also in vitro the efficacy of killing Hep-2 cell phocyte activated by DC ined through MTT. In vivo the tumor occurrence rate of nude mice previously subcutaneously injected the specific CTL (6 from precaution group， 16 from control group) and its groong the 16 Hep-2 implanted tumor nude mice treated by specific CTL once or t control group， 5 from treatment group and 5 from retreatment group respectively). Results I-1640(GIBCO公司)、20%胎牛血清(FBS)、2 mmol/L谷氨酰胺、20 mmol/L HEPE是(SIGMA公司)、l mmol/L丙酮酸纳、100 U/mL青霉素、80 U/mL庆大霉素：rhGM-CSF(华北制药厂)，rhIL-4、rhIL-2 (BIO公司)，rhTNF-α(EC公司);淋巴细胞分离液(天津)，尼龙毛 (上海);四氮唑蓝盐(MTT)(华美生物公司);小鼠抗人CD83McAb(深圳裕盛佳公司)，S-P免疫细胞化学染色试剂盒(迈新生物公司)。Il640调整细胞浓度至1×107/mL，取5 mL加入T-25塑料培养瓶，37 ℃，5%CO2孵箱培养2 h后，吸除未贴壁细胞即获贴壁单核细胞，加入完全培养基、rhGM-CSF 1 000 U/mL、rhIL-4 1 000 U/mL常规培养，每2 d换液1 次。第四天将细胞分为2 组：负载组另加Hep-2冻融抗原5×106/mL (抗原量以冻融前Hep-2细胞数计)、rhTNF-α200 U/mL;未负载组不加冻融抗原，继续培养4 d，收集悬浮细胞，部分用完全培养基重悬浮备用：余用小鼠抗人CD83McAb以S-P免疫细胞化学染色法鉴定。 　　1.5 CTL的体外诱导及活性检测 　　取与DC来源相同的新鲜外周抗凝血，同上法用含20%FBS的RPMIl640调整单个核细胞浓度小于1×108/mL，注入自制的T细胞尼龙毛柱，37 ℃温育1 h后用上述培养基冲洗出非粘附细胞即为T淋巴细胞;将其分与两组DC按10：1的比例混合，加含IL-2 1 000U/mL的完全培养基，37 ℃，5%CO2孵箱培养72 h，分收集细胞(CTL)。用含10%FBS的RPMI-1640重悬