基体辅助激光解眼质谱法测定蛋白质分子量 - 上海有机化学研究所.pdfVIP

化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1995,53, 889-894 基体辅助激光解眼质谱法测定蛋白质分子量 钟峰赵善楷* (中山大学测试中心广州 510275) 摘要 本文叙述用自行研制成功的激光微探针飞行时间质谱仪及采用基体辅助激光解吸的新方 法，对溶菌酶、细胞色素C、肌红蛋白、膜蛋白酶、蛋白酶、自蛋白等多种蛋白质的分子量进行 测定，并对蛋白质握合物进行分析，得到满意的结果.此方法测定蛋白质分子量具有速度快(十 15 分钟一个样品)，准确度高(士 1 %-0.1%)，灵敏度高(lO-12-10- mol)等优点，是传统生物方法 难以比拟的. 关键词 激光质谱，蛋白质，分子量测定 长期以来，分析化学家和生物学家都在寻求一种快速、准确、灵敏的分析蛋白质等生物 大分子的方法，由于这些生物大分子极性大、分子量巨大、不挥发及热不稳定等特点，用传 统的质谱法很难对其测定.但在近二十年来由于许多新的软电离技术的发展和应用，使质 谱法在生物大分子的分析中取得巨大进展，这些新的软电离技术主要包括场解吸 (FD)，快 原子轰击 (FAB)，二次离子质谱 (SIMS)，等离子解吸 (PD)，电喷雾 (ES) 和基体辅助激光 解吸/电离 (MALDI)等，其中近几年出现的基体辅助激光解吸法和电喷雾质谱法能实现分 子量在几万道尔顿以上大分子蛋白质的测定，成为质谱学家和生化学家的一个研究热点[1] 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 所用仪器为自行研制的激光微探针飞行时间质谱仪，仪器结构如图1.其基本原理为固 2 体或液体样品在真空状态下受不同功率密度(一般 106-109W / cm ) 的激光脉冲辐照，被解 吸电离或形成等离子体，所产生离子受电场加速进入无场飞行区，并依其质荷比不同而先后 到达检测器，所产生信号由瞬态记录仪记录而获得了该样品的质谱图，仪器所用激光器为掺 铀缸铝石榴石激光器，激光可通过在离子源外两组透镜分别聚焦为直径 10，um 和 100μm 焦 斑，激光被长经借频器可提供 1064nm， 532nm, 355nm 和 266nm 四种波长选择;离子源的 加速电压为+3.0kV，后加速电压为一30kV; 工作方式有线性和反射两种选择.在本实验中的 大分子物质分析时我们采用了 100μm 焦斑， 355nm 波长和线性工作方式. 所用样品:芥子酸(东京化成工业株式会社)、细胞色素C 潜菌酶、膜蛋白酶w 肌红蛋 白、白蛋白、蛋白酶、环十肤和膜岛素均为美国 SIGMA 公司生产，所购得分析样品直接 用于分析而未需作进一步纯化处理. 1994-03-12收到.修改稿1994寸记-22收到 .890. ACTA CHIMICA SINICA 1995 化学学报 He-Ne.壳 固 1 激光微探针飞行时间质谱仪结构示意图 田 国 S R - - - m u M+ 23如 2ØØØ søøø i盼刨 2ØØØØ 3ØØØØ 4ØØØØ 分子量lu 250 x 1O-15 1 的细胞色素C 的质谱图 圈 2 mo