骨折愈合过程中BMP2和TGFβ1mRNA的表达与凋亡的相关性论文.docVIP

　　骨折愈合过程中BMP2和TGFβ1mRNA的表达与凋亡的相关性论文 .freelRNA的表达与凋亡发生的相关性及意义. 方法 建立颌骨骨折模型，利用原位杂交方法检测骨折愈合的不同时期BMP2和TGFβ1mRNA的表达，同时采用TUNEL法检测细胞凋亡，并进行相关性分析. 结果 ①骨折愈合早期（5～11d）的间充质细胞、成骨细胞和软骨细胞内有BMP2mRNA表达，而TGFβ1mRNA主要在骨折愈合后期（11～14d）的成骨细胞和软骨细胞内表达;②细胞凋亡在骨折愈合的5d和11d最多，以间充质细胞和软骨细胞为主;③BMP2mRNA的表达与凋亡具有正相关（r=0.887，P 0.01）.freelRNA的表达与凋亡无相关性（r=0.51，P 0.05）. 结论 骨折愈合过程伴随凋亡的发生，以控制细胞的数量和清除无用的细胞，BMP2可能直接参与了凋亡发生过程. Keyorphogeic protein;transforming groor-phogeic protein2（BMP2），transforming groRNA expression and apoptosis during fracture healing and its significance.METHODS An experimental model of fracture RNA and apoptosis in the different stages of healing by using in situ hybridization and TUNEL methods.RESULTS ①BMP2mRNA esenchymal cells，osteoblasts and chondrocytes on5～11d RNA in osteoblasts and chondrocytes on11～14d post-fracture;②the apoptotic cells increased markedly on5d and11d，especially in mesenchymal cells and chondrocytes;and③there RNA expression and apoptosis（r=0.887，P 0.01）.TGFβ1mR-NA and apoptosis had no correlation（r=0.51，P 0.05）.CONCLUSION Apoptosis is a normal conitant of frac-ture healing serving the purposes of controling cell number and eliminating useless cells.BMP2may participate directly in inducing the apoptotic process. 0 引言 骨折修复愈合包含了细胞趋化、聚集、增殖和分化等一系列复杂的组织变化，有许多生长因子参与了这一过程，如BMP，TGFβ，FGF等，它们在胚胎发育的细胞凋亡中也扮演了重要的角色［1，2］ .细胞凋亡是一种主动死亡过程，涉及一系列基因的激活、表达和调控，近年来发现凋亡也参与了创伤修复的全过程［3］ .为了了解生长因子与细胞凋亡的关系，本实验在建立颌骨骨折模型的基础上，利用原位杂交法观察BMP2和TGFβ1mRNA在骨折愈合不同时期的表达，同时利用末端脱氧核苷酸酶TdT介导的dUTP-X切口末端标记（TdT-mediated dUTP-X nick end labeling，TUNEL）法，检测细胞凋亡的发生，探讨BMP2和TGFβ1与凋亡的相关性以及在骨修复中的作用. 1 材料和方法 1.1 材料 pSP65-BMP2质粒由美国遗传研究所annheim公司;TGFβ1寡核苷酸探针和TUNEL kit购自美国Oncogene Sci-ence公司.家兔骨折模型的建立、标本处理（骨折后1，3，5，7，11，14，21和28d取材）、探针标记及原位杂交等均参照以往方法进行［4］ .正常骨作为对照. 1.2 方法 切片常规脱蜡至水，PBS（0.05mol L-1 ，pH7.5）洗5min，蛋白酶K孵育15min;PBS洗涤后，在30mL L-1 H2 O2 中孵育5min;PBS洗涤后擦干切片周围，加平衡buffer25μL，37℃孵育1min;擦干切片周围，加TdT酶25μL，37℃孵育2h后，加入37℃预热的中止buffer，37℃孵育30min，每10min更换中止buffer1次;显色过程同原位杂交.正常骨作为对照.利用10×10网格，在40×物镜下，每个时间点随机选取