骨髓基质干细胞修复软骨缺损的实验研究论文.docVIP

　　骨髓基质干细胞修复软骨缺损的实验研究论文 【摘要】 探寻体外诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，寻求体内修复家兔软骨缺损的最为有效方案。［方法］rhFGF1、rhTGF-β1、rhIGF-I单独或联合应用对骨髓基质干细胞进行体外诱导培养，应用常规染色、MTT、免疫组织化学染色的方法筛选诱导骨髓基质干细胞成软骨细胞的最佳细胞因子，并将其与骨髓基质干细胞复合于纤维蛋白凝胶制成凝胶复合物，直接种植到兔膝关节实验性关节软骨缺损处，并与对照组相比较，观察软骨修复效果。［结果］常规形态学观察，rhTGF-β1和rhIGF-I联合应用诱导的细胞在形态上类似于软骨细胞.freelarroal cells (bMSCs) into chondrocyte in vitro and to explore an effective plan to repair rabbits chondrocyte defect.［Method］Isolated bMSCs ing Groacroscopic histology , HE staining and immunohistochemical examinations ed to seek the best cell factor. In vivo , to investigate the repair of the articular cartilage, bMSCs bined ilar to chondrocytes in morphology, and immunohistochemical examinations shoarroal cells into cartilage cells in vivo, and repair the articular cartilage defect. The control group could not repair the articular cartilage defect efficiently.［Conclusion］rhTGF-β1 and rhIGF-I are best group ulate bMSCs to differenate into cartilage cells. BMSCs bined arroal cells; chondrocyte; cartilage defect 作者简介：童培建(1961-)，男，杭州人，教授，主任医师，在读博士研究生，研究方向：关节外科，(电话)0571骨髓基质干细胞（BMSCs）中含有少量的多功能基质干细胞，能向成骨系细胞、成软骨系细胞分化［1］，为骨、软骨组织的损伤提供了潜在的修复可能。临床软骨缺损自行修复的效果较差，可能跟软骨损伤局部BMSCs的含量少有关。因此作者通过对BMSCs在体外扩增培养、应用不同的细胞因子进行诱导，从中寻找体外促进骨髓基质干细胞增殖分化的最佳条件，并将细胞因子与骨髓基质干细胞复合于纤维蛋白凝胶制成凝胶复合物，植入缺损处，探讨体内修复家兔软骨缺损的效果。 1 材料与方法 1.1 骨髓基质干细胞的取材与培养 取新生红皮胎兔２只（24 h内），置入浓度为75％的酒精中浸泡消毒5 min，在超净工作台中，无菌分离四肢长骨骨干，剔除软组织，在10％的DMEM培养液中剖开骨干，反复吹打髓腔。将细胞悬液移入离心管中，加入Hanks液至10 ml，平衡，1 500 r／min离心10 min，弃上清，加入10％ DMEM，反复抽吸吹打均匀，计数，按1×10７接种于２５ ml培养瓶中，37℃ 5％饱和湿度培养箱中常规培养。5 d后首次全量换液，以后每3 d换液1次，待细胞融合至80％时，0.25％胰蛋白酶常规消化，按１:３比例传代培养。逐日倒置显微镜观察培养细胞的生长情况。 1.2 体外实验分组 实验分组如下：rhFGF-1组（简称F组）；rhIGF-Ⅰ组（简称I组）；rhTGF-β1组（简称T组）；rhFGF-1+ rhIGF-I组（简称F+I组）；rhFGF-1+ rhTGF-β1组（简称F+T组）；rhIGF-I+rhTGF-β1组（简称I+T组）；rhFGF-1+rhIGF-I+rhTGF-β1组（简称F+I+T组）；对照组（不加任何试剂）。其中rhFGF-1浓度为10 μg/L; rhIGF-I浓度为10 μg/L; rhTGF-β1 I浓度为5 μg/L。 1.3 MTT比色法测定 取第2代骨髓基质干细胞以1×104/ml接种到96孔培养板上，共4块，常规培养24 h。待细胞完全贴壁后，弃上清液，将每块孔板随机分组，每组8孔，按实验分组添加相应的细胞因子，分别于第1、3、6、9 d各取孔板1块，进行MTT检测：即每孔加5