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快速蛋白质液相层析（FPLC ） 编制者：崔恒林 ÄKTA purifier 100 是快速分离肽、核酸和蛋白的全新液相色谱系统，全机 流路采用 PEEK 惰性塑料，流速范围宽广，为 0.01-100 ml/min 。除了操作简单， 大量应用工艺和方法模板外，AKTApurifier 还加进了很多尖端功能去缩短实验准 备和运行所需时间，大大提高实验结果的可靠性和重复性。仪器的主要技术参数： 泵流速为 0.01-100 ml/min ；最大耐压为 600psi ( 40bar ) ；紫外检测范围为 0.01-5AU ；波长选择有254 nm 和 280nm ；温度范围为4-60 ℃；电导率范围为 1 us/cm-999.9 ms/cm 。系统组成：本系统由控制系统（Monitor UPC-900 ）、泵 （Pump-901 ）、混合仪（Mixer M-925 ）、进样阀（Valve INV-907 ），紫外检测 仪和部分收集器（Frac-920 ）等部件组成。系统特点 1、高压：供液压力和进样 压力都很高，一般可达 0-5Mpa 。2 、高速：载液在色谱柱内的流速比经典液相色 谱高很多，可达 0-100ml/min 。3、高效：由于采用了新型的固定相,提高了分辨 率。4 、高灵敏度：采用了基于光学原理具有高灵敏度的检测器，之外吸收检测， 灵敏度可达到 10-9g/ml 数量级。5、梯度洗脱：洗脱液的组成可以是连续变化的， 增加了洗脱强度，缩短了分析时间。 使用注意事项与维护保养 虽然 ÄKTA purifier 100 的自动化程度极高，但该仪器极易受外界因素的影 响甚至损坏，使用该仪器必须严格按使用规范和操作手册进行。 1、开机。确认将ÄKTA purifier 100 主机与电脑电源连接在稳压电源输出端。 先开 ÄKTA ，后开电脑。 2 、关机。确认退出所有程序后，关闭电脑后关闭ÄKTA purifier 100 主机电 源。 3、所有流动相和样品均应用 0.22 微米孔径滤膜过滤，以防堵塞纯化柱。 4 、所有管路均应保存在 20% 乙醇中，防霉防菌。 1 5、系统泵循环洗涤管应置于20% 乙醇中，定期更换，以保护泵头。 基本操作 1、进样方法选择 自动运行 Run/Instant Run——运行预编好的方法 (Run) 或直接运行模板 (Instant Run) 。手动运行 Manual——利用手动窗口 (Manual) ，手工执行系统命 令。自动加手动——在自动运行过程中可同时执行手动命令如有冲突，以后执行 的命令为准。 2 、方法编辑 编辑方法(Method Wizard, Run Setup, Text Instruction) ；编辑层析柱列表 (Column List) ；编辑缓冲液配方 (BufferPrep Receipt) 。 3、运行启动 自动运行；手动运行。 4 、收集方式 收集器自动收集样品；手动收集样品；收集器自动峰收集。 5、结果处理 文件管理；积分；曲线操作 6、结束实验 实验结束后，必须运行系统泵管清洗后，才能关机。 操作实例——脱盐 1、洗泵。更换样品对应的buffer ，运行pumpwash ，25ml 约 1.5min。 2 、装柱。调流速至 1ml/mi，alarmpresure 为 0.3 mpa 。将进水导管连接至柱 入水端，取下柱出水端堵头，当 buffer 流出时，将柱出水端接入固定架。 3、平衡柱子。调流速至 3ml/mi 。用平衡buffer 清洗 loop 进样环