三叶半夏（PinelliaternataThunb．Breit的间歇浸没.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（１１）：４９５４ 三叶半夏（Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｅｉｔ） 的间歇浸没培养 １，２ ２ ２ １，２ １ 贾明良 　张本厚 　高伟平 　陈集双 　欧阳平凯 （１南京工业大学生物资源工程研究所　南京　２１０００９　２南京工业大学大丰海洋产业研究院　大丰　２２４１４５） 摘要　目的：利用间歇浸没培养反应器对药用植物三叶半夏（Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｅｉｔ）进行 组培快繁研究。方法：以增殖倍数、鲜重、平均鲜重、折干率和组培苗状态为指标，一方面对三叶 半夏叶片、叶柄及丛生芽体进行培养，考察适合间歇浸没培养的外植体类型；另一方面以叶柄为 外植体对三叶半夏进行间歇浸没培养、固体培养和液体摇瓶培养，考察三种培养方式对其生长的 影响。结果：不同的外植体在反应器内培养时，从增殖情况来看，丛生芽作为外植体得到的增殖 倍数高达３９．１５，叶柄为２７．６５，叶片为１８．０５。鲜重方面与增殖倍数具有相同的规律。从平均鲜 重和折干率来看，无显著差异。由组培苗形态来看，以叶柄诱导的组培苗最为健壮，而以丛生芽 诱导的组培苗则较为细弱。不同培养方式下的增殖倍数分别为：间歇浸没培养方式最高为２４．７３， 其次固体培养为１４．７５，液体摇瓶培养为１２．２６，差异显著。平均鲜重和折干率均为间歇浸没培养 最优。由组培苗形态来看固体培养优于间歇浸没培养，反应器得到的组培苗较为细弱。在保卫 细胞长宽和叶绿体个数上两者没有显著性差异。而液体摇瓶培养玻璃化导致叶绿体个数减少， 不适合培养三叶半夏的。结论：较适合间歇浸没培养的外植体类型为叶柄和丛生芽，以叶柄为 优。间歇浸没培养方式相对于传统的固体和液体培养在各项生理指标上表现较好，具有大规模 培养三叶半夏的潜力。 关键词　三叶半夏　生物反应器　间歇浸没培养　植物组织培养 中图分类号　Ｑ８１９ 　　三叶半夏（Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｅｉｔ．）为天 　　间歇浸没培养方式是指利用一定的装置实现对植 南星科半夏属，其药用史已有２０００余年，是中国最常 物组织器官间歇性供给培养液进行培养的方式。间歇 用的传统中药材之一。半夏具有燥湿化痰、降逆止呕、 浸没培养反应器往往比传统的培养容器容积要大，且 消痞散结之功效，多用于痰多咳喘、风痰眩晕、呕吐反 自动化程度更高，可减少培养时的人力投入，并且可以 ［１］ 大大提高增殖率，为低成本生产大量高质量的种苗提 胃及胸腕痞闷等症 。半夏的组织培养研究始于２０ ［２］ 供保障［４］。间歇浸没培养国外研究较多，并且已经发 世纪８０年代 ，至今已有近３０年的历史。传统的半夏 展出多种培养用的反应器，并以气泵驱动ＲＩＴＡ 间歇 大规模扩繁的步骤繁琐，尤其是在丛生芽继代培养以  浸没式生物反应器和ＢＩＴ 间歇浸没式生物反应器较 及生根培养时需要耗费大量的人力、物力。半夏的一  ［３］ 为成熟。并对兰花、马铃薯、香蕉等多种经济作物进行 步成苗法 能够避免大量的人力消耗，但是培养基配 ［５］ 制，灌装和随后培养瓶清洗等工作以及琼脂的大量消 了培养研究和实际的生产应用 。国内对这方面也有 耗仍然无法避免。 报道，也有利用间歇