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基因工程与转基因生物 转基因技术的运用 微生物基因工程 转基因生物产品的安全性 * * 第三节 一 基因工程的基本内容 主要内容 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 什么叫基因工程？ 基因工程是指依据预先设计的蓝图，用人工方法将某种生物的基因，接合到另一种生物的基因组DNA中并使其表达，使后者获得新的遗传性状，产生出人类所需要的产物，或创造出新的生物类型的现代生物技术。 （一）基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的简要过程： （一）基因工程的概念 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌（含抗虫基因） 提取 抗虫基因 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ （一）基因工程的概念 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 特点：特异性（专一性） 限制酶能识别双链DNA分子的某种特定的脱氧核苷酸序列，并且切断其中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键。 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （二）基因操作的工具 限制酶 基因的针线——DNA连接酶 （二）基因操作的工具 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ （二）基因操作的工具 导入过程需要运输工具——运载体。 运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 基因的运载工具——运载体： （二）基因操作的工具 常用的运载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒 2）噬菌体或某些动植物病毒 质粒：是基因工程最常用的运载体 （二）基因操作的工具 质粒是细菌中独立于拟核DNA以外的，能自主复制的双链闭环的DNA分子。 大肠杆菌的质粒： （二）基因操作的工具 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因（ 如抗青霉素基因，抗四环素基因）。这些基因可做标志基因，进行重组DNA的鉴定和筛选。 四个基本步骤： （三）基因操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）筛选含目的基因的受体细胞 目的基因 （三）基因操作的基本步骤 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 目的基因的提取方法 （三）基因操作的基本步骤 从生物细胞中分离目的基因 化学方法人工合成目的基因基因： 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：进行基因定位 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体重组 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体结合 （三）基因操作的基本步骤 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 步骤三：目的基因导入受体细胞（能接纳重组质粒的活细胞） （三）基因操作的基本步骤 步骤四：筛选含目的基因的受体细胞 成功率：10-7 P58 植物基因工程 动物基因工程 受体细胞：受精卵 显微注射法P60-61