第五章 发酵工艺控制3.ppt

发酵工程及设备Fermentation Engineering and Equipment 王彦杰 黑龙江八一农垦大学 生命科学技术学院 HLJ August First Land Reclamation University 补糖量 　　补糖量的控制以控制菌体浓度不增加或略增加为原则，使产生菌的代谢活动有利于产物合成。 不同补糖速率对发酵的影响 初糖浓度为80g/L，发酵30h后 ,分别以10g/L·h、25g/L·h、40g/L·h的补糖速度进行补糖，结果见表3。 　　在三种补料方式中，采用恒速流加方式发酵结束后残糖最低，间歇定量相对较低，残糖量较高的是一次定量流加方式，从缬氨酸的产量，糖酸转化率及菌体浓度比较也是恒速流加的补料方式效果好。 培养条件 装量3L,接种量5%. 空气流量为1L/L· min 用适量的酸、碱调节培养液的pH至６.5 温度30℃，转速150r/min，培养12 h，然后流加40g/L的葡萄糖，72h培养结束。 恒一pH补料的培养模式 根据培养基pH变化，流加40g/L的葡萄糖，当pH降低时，加入碱液调节pH，达到设定的数值。根据糖的消耗加入适量的葡萄糖，由于葡萄糖的分解使pH下降，当pH下降至一定程度之后，则又加入适量的碱液使pH升高，如此反复至60　h流加结束，72h培养结束。 图4表示了恒pH补料分批培养的实验结果，可以看出，采用恒一pH补料分批培养既可以获得较高的菌体浓度，菌体中的GSH含量又较高，达到了菌体合成和GSH生产的相对统一，因此，发酵液中的总GSH含量最高。 End Thanks! （1）补有机氮 　　添加某些具有调节生长代谢作用的有机氮源如尿素、酵母粉、蛋白胨、玉米浆，保持菌的活性，补充产物合成所需的氮源。 　　有时与碳源一起配合补料，工厂称作补混合料。 例：土霉素发酵前期补2～3次酵母粉，放罐单位比对照高1500u/ml。青霉素发酵47h开始加尿素，每6h补加一次，结合补加乳糖，发酵单位可达40000u/ml以上。 补料依据：氨基氮的消耗、菌的浓度、pH 在谷氨酸生产中，前 12h为菌体生长阶段，由于菌体生长快，氮被利用，使pH下降，这时要及时流加尿素，供给菌体生长所需的氮源并调节pH,生产阶段菌体生长停止，尿素补尿酶分解为氨，pH上升，氨被利用合成谷氨酸，使pH下降，再次添加尿素。 补无机氮源 通氨 　　通氨是某些抗生素提高产量的有效措施，它的作用是补充无机氮源和调节pH。通氨一般使用压缩氨气或氨水（20%），采用少量间歇添加或自动添加，由空气管道流入与发酵液均匀混合。氨浓度控制通过测定氨的比消耗速率，菌的比生长速率，产物比合成速率、pH值来控制补加速率。 补硫酸铵 例：林可霉素原来基础培养基中（NH4）2SO4为0.6%，18h后减少到7mg/100ml,发酵后期缺少氮源． 改进工艺：将基础培养基中（NH4）2SO4 　减少为0.5％，14.6h开始补加30% （NH4）2SO4溶液，根据培养液的pH和ＮH2-N浓度控制补加量．正常情况下ＮH2-N保持在10mg/100ml以下，平均补加（NH4）2SO41.5%,提高了发酵单位。 补氮控制：补氮时间、补氮量、补氮方式 根据氮的消耗速率、菌浓度、发酵液粘度、pH来决定补料的时间和补料的量。 补充黄豆饼粉、酵母粉一般采取分批补料，而无机氮源和尿素一般采取流加的方式，因为这些氮源对pH 影响大，而且过多的氨离子会对菌的生长产生抑制作用。 3.补前体和无机盐 在发酵过程中添加前体可以显著增加产量及控制发酵方向。 青霉素G合成的前体 　β－内酰胺环：α－氨基已二酸、缬氨酸、半胱氨酸 侧链：苯乙酸 前体确认实验 用同位素标记原子来证实 苯环中含H2的苯乙酸 D1-N 15－缬氨酸 加入到发酵液中，测定所形成的青霉素分子内的H2 ，发现有92.5%的青霉素由该前体形成，而青霉素中的N 15只占2.69%。 证明苯乙酸部分进入青霉素 苯乙酸对青霉素产量和类型的影响 苯乙酸添加速度% 添加时间的影响 在肌苷生产中发酵需添加次黄嘌呤作为前体，实验表明24h、48h补加，分别增加产量199%和130%，可见24h时补比48h补加增加产量更多。 4.补水和无机盐 当发酵液过于粘稠时补水可以稀释发酵液，增加氧的溶解度，提高供氧能力。有的抗生素发酵中采用带放的措施提高总产量。 有些金属离子特别是二价阳离子是酶的激活剂，适当时间补入无机盐可以提高酶活，从而提高产量。 pH t 补料浓度的确定可以以摇瓶的基质残留浓度为依据进行试验。 当同时需要补充碳源和氮源时可以混合起来一起加入。 补入碳源还是氮源以及它们的量要根据产物的分子结构及细胞组成来决定。有的发酵氮源很低也不需补氮源，是因为产物分子中几乎不含氮