猪链球菌ZKHY株谷氨酸脱氢酶基因的克隆和序列分析.pdfVIP

第十二扶学术研讨会会议论文燕 2j应用试验 阳性、2份为7型链球菌阳性、3份为9型链球菌阳性(俐4)。。性?端豢撇?瓣裟淼鬻攀躲”雠8惰临削蚴轴 M I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ll 目4 ssl、ss7、ss91；直PcRⅨ*4ijⅡ月试§ D10㈣Ma 注+M rke叫～11：11株猪#球菌分离％他株 3讨论 致病件猪链球菌对养猪业危害严重，引起猪和人发病的猪链球菌血清型除观外．还有9型．7 型、l，2型、l型及】4型等，不同地区流行的致病性链球菌血清型也各不相同：不同血清型的猪链球 菌之间缺乏交叉保护力，这是造成当前猪链球菌疫苗免疫失败的上耍原因之。嘲此。对不同地区 发生和流行的致躺性猪链球菌血清型进行快谜诊断和分型研究对丁猪链球苗的早期防治、疫苗免疫、 公批卫生及综合防控等具有重要意义。 利用PCR技术对猪链球曲进行诊断及血清掣分犁就方法与常规细菌分离鉴定方法相比具有更加 快速、敏感、特异的优点，但国内外对致病性猪链球菌诊断的研究丰要集中在跚的研究上(Tav啪d etd，2006，Yuetm，2006)，有关其他致病性猜链球茼血清型的研究报道较少，本研究 al，1996；T卸g 以特异性叩j，，、删婀、叫册摹因序列为模板设计型特异引物建立了嚣，、s盯、黜9型多重PcR方法， 多重PcR检测方法可对单始，，龉7，黜9标准株样品及三个标准株DNA混合样品扩增卅相麻的目的 条带，但对锄标准株及其他6种常见病蟓茼均未扩上f}出任何条带，表明该检测方法具有好的特异性； 灵敏度试验结果显示该检《4方法最低检测量为100cFu，表明该检测方法具有好的敏感性：3敬重复 性试验结果完全一致，表明该方法稳定性和重复性好。三次重复试验结果完全一致．表明建立的多 重PcR方法稳定性和重复性好。 利用所建立的PcR检测方法对ll株临床分离鉴定的猪链球菌样品检测结果表明，1l株l临床分离 株中船9、船7型阳性率分别为273％和182％，这表明在我国猪群感染猪链球菌病例中册和船7型感 染具有较高的比例，因此建议临床上在重视s船感染控制的同时，还应该加强对册，盯7型感染的防 控。 本研究结果为l豳床上致病性时，、船7、盯9血清型猪链球苗的快速鉴别诊断和分型提供了一种新 方法，对猪链苗病防控具有重要的意义。 ●考文t(■) 猪链球菌zKHY株谷氨酸脱氢酶基因的克隆与序列分析 (1。。。+。。。。。。；鬣勰，：篙i焉匙；；；巍。。黼—：H南农Ⅱ走学牧Ⅸig学＆，河南郑州，450002：2都H牧Ⅱ高等专科学枝，目南郑卅，450002 #薹对特链球菌zKHY株的咎氧酸脱氯醉基目㈣)进行克隆和序列分折+为进一步研究其自％打T基础．d 酸的目瓣＆分析．成自地克隆T猪链球菌zKHY株目善氧醣％氢t}基目．序“§析Ⅱ}zKHY与6拒道的猪链球茴 月曲基目有紧密的素雅关i，#畦序“与2，7，9n十主要致病血清■的目#*在972％一984％，葬中与2型菌株 2％一97 目a性在97 3％，与71茸株在984％，自9■在976％．其％码的氨基酸序列目#性则要高，与G岫∞k 猪的传染病一猪细菌病 中已收录的序列同源性在98．9％以上。该分离株可能是属于2，7，9型之外的其它致病的血清型；所克隆的基因在 猪链球菌之中非常保守，可以进行表达，进行免疫学方面的相关研究。 关键词猪链球菌；谷氨酸脱氢酶基因；克隆；序列分析 suis)分为35个血清型，是一种重要的细菌性人兽共患病病原，可引起 猪链球菌(Streptococcus 猪的脑膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、脑炎、流产、多发性浆膜炎和支气管肺炎…，人的败血 症、脑膜炎、心内膜炎和永久性耳聋等123J。给养殖、Ik造成很大的经济损失，引起极大的公共卫生关 注。发病猪群的死亡率可达80％，人也可以感染发病而死亡。2005年我国四川省首先发生人感染猪 链球菌2型病例，并向周边省份漫延。截至8月6日，我国四川、重庆、广东、香港、江西、江苏 。等省市人感染猪链球菌病共导致43人死亡，引起了巨大的恐慌和经济损失。目前已报道的毒力因子 氢要酶(GDH)、纤连结合蛋白(FBN)以及粘