沟眶象纤维素酶性质的研究.pdfVIP

第28卷 第4期 农 业 科 学研 究 2007年12月 Vo1．28 No．4 Journal of Agricultural Sciences Dec．2007 文章壤号：1673—0747(2007)04—0016—04 沟眶象纤维素酶性质的研究 雍惠莉 ，杨贵军 ，于有志 ，王新谱 (1．宁夏大学 农学院，宁夏 gJ,I 750021； 2．宁夏大学 生命科学学院，宁夏 #-J,I 750021) 摘 要：对沟眶象成虫肠道内纤维素酶的组成、性质和水解动力学特征等进行研究．结果表明，沟眶象成虫肠道内 有完整的纤维素酶系，其中以内切J争l，4一葡聚糖酶(C 酶)活性最强，外切J争l，4-葡聚糖酶(C 酶)次之，J争l，4-葡萄糖 苷酶的活性最弱；C 醇、Cl酶的最适作用温区分别为 3O～55℃和4O～6O℃，最适作用温度分别为 45℃和 55℃；最适pH值分别为5。6扣5．0；C 酶具有最强的热稳定性，Cl酶热稳定性较弱；动力学参数比较显示，C 酶的 最大反应速度(‰ )和米氏常数(K )均最大，而 l，4一葡萄糖苷酶的K 和 均最小． 关t词：沟瞻象；纤堆素酶；组成；性质；动力学特征 中曩分类母：Q966 文献标志码：A 沟眶象(Eucryptorrhynchus chinenis(0livier))属 1．2 纤维素酶液的制备 鞘翅目象甲科隐喙象亚科昆虫，是我国特有的钻蛀 每次实验取沟眶象成虫5头，在室温下饥饿24 h 性害虫，主要危害椿树，是森林植物检疫对象．成虫 后称其质量，在冰水浴下解剖取出其消化道，按每5 产卵于根部皮下组织内，幼虫及蛹在树体内，且发生 个虫体6 mL乙酸一乙酸钠缓冲液(pH一4．6，浓度为 很不整齐，所以防治难度很大，对城市绿化树种臭椿 0。2 mol／L)进行冰浴匀浆，迅速在4℃和16 000 r／rain 和千头椿等椿类树木可以造成毁灭性危害．宁夏于 条件下离心匀浆液10 min，取上清液作为测试用酶 1999年6月在石嘴山市大武口森林公园首次发现， 液，贮于--26℃冰箱中备用． 目前已蔓延到银川平原L1]．虫害主要由从华北、华 1．3 纤维素酶活性测定 中、华东地区购置的椿树类树苗携带而来，已被列入 用3，5-二硝基水杨酸(DNS)法L2J测定纤维素酶 宁夏补充林业检疫性有害生物名单． 的活性．分别以体积分数为1 的微晶纤维素(MC)、 沟眶象主要以椿类林木韧皮部、木质部和叶片 体积分数为1 的羧甲基纤维素钠(CMC．Na)和体积 为食物，通过消化其中的纤维素获得养分，而纤维素 分数为1 的水杨素(Salicin)作底物，测定45℃下外 酶是其肠道内消化纤维素的重要消化酶类．本实验 切 l，4一葡聚糖酶(C1酶)、内切 l，4一葡聚糖酶(C 对沟眶象成虫体内纤维素酶的组成、性质和动力学 酶)和 l，4一葡萄糖苷酶的活性．3种底物均用乙酸一乙 参数进行研究，为寻找防治沟眶象的新方法和可持 酸钠缓冲液(pH=4．6，浓度为0．2 mol／L)配制． 续控制提供科学依据． 取上述底物2 mL、酶液0．2 mL混匀，在45℃ 水浴中保温1 h后，加入DNS显色剂2 mL，立即在 1 实验 沸水浴显色5 min，流水冷却，稀释定容至25 mL．于 1．1 材料 490 am处测吸光度(0D值)，每处理重复3次，同时 1．I．1 成虫来源 2006年4月至8月