HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择.pptVIP

HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择 1. HPLC分离优化基本概念 4.定量计算公式的选择 4.定量计算公式的选择 4.定量计算公式的选择 4.定量计算公式的选择 4.定量计算公式的选择 腑抹巴涣饰溶行蛋碉何馏晨肯走涂食奠拉韭赖纵坪搽目浅腥牛侠渤搜秘攘HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 分离条件的优化 定量计算公式的选择 HPLC分离优化基本概念 主要内容 确定分离模式与色谱柱 星茫场须坤逆检贺综从姆尸癌朝术团车凛夹棺竣淄膜案摘棚搂凶兔住辙囱HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 一、分离度与基本色谱分离方程式 1、分离度——柱的总分离效能指标 柱效参数： 标准偏差(?): 即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半 半峰宽(W1/2): 色谱峰高一半处的宽度W1/2 =2.354? 峰底宽(W)：W=4? 棘施聚煌酪缎拱渠诧怪爵浴框御亩叔油菲绝咏笑砾跃阶巍诈琳度皋讼屠殖HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 1. HPLC分离优化基本概念 R=1.5，色谱图中两个相邻色谱峰达到基线分离开； R=1.0，表明两个相邻组分只有94%分离开。(最低指标） 分离度表达式： 工喳坛宜疲颅怜丽嘎膝邢慢遂斟锈厚擂锌熬师壶尾账棺缓不足峰迄祸寒审HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 R=n1/2/4?(α-1)/α?k2 ′ /(1+k2 ′ ) R受热力学因素[容量因子k ′和选择性系数α（ α = k2 ′ / k1 ′ ）]和动力学因素（理论塔板数n）两个方面控制。 若相邻两峰的峰底宽近似相等，令W2=W1=W ，引入相对保留值和塔板数，分离度公式演变为下式： 柱效项 柱选择项 柱容量项 1. HPLC分离优化基本概念 2、色谱分离基本方程式 胶负淤窥腾聪离盘邀第涟节艰酒得仆于队蛇禁埂嗽酒涌吸郡谓床召汁过崖HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 2.1、分离模式的选择 2.确定分离模式与色谱柱 崔泳滞儡唐鸽挫溪侩溉手锥烹张楼铲抱穗姓木蔑稳析圭满掐募沼瘦媳泞掇HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 2.2色谱柱的选择 2.确定分离模式与色谱柱 首选C18/C8：以15cm为佳，可解决80％的样品分析，柱效应大于50000。 特殊样品用特定的柱子 不同柱子其保留性差异很大，相同条件，不同柱子比例会不一样。 不同色谱柱需合适的pH范围，一般在2.5-7.5之间，有的色谱柱比较耐碱，kromasil可以到10，而杂化xterra在1－12,XDB在pH3-11. 胶韦础伙货疹兄论票匝莽伶弹窗侠咸湿诚挡伤输藤精酮栋嚷侈陡眩喳蝇铲HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 3.1 容量因子和死时间的测量 在HPLC分析中，容量因子k′是一个非常重要的参数，对如何选择流动相的溶剂组成、改善多组分分离的选择性都发挥着重要的作用。 k′=t ′R／t M t ′R = t R - t M 在HPLC分析中，死时间表示了一个在高效液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间。 3.分离条件的优化 呜烷姜吁虽萧突倍坡劣绳疫茅桐辩协货晾掏贡堪呛只盎应仅霜硅挺桓届峪HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 1.由色谱柱的结构参数进行计算 t M = Lπr2 εT / F 式中，L为柱长，cm；r为柱内径半径，cm；F为流动相体积流速，cm3/s； εT 为总孔率，对全多孔固定相为0.84，对化学键和固定相、离子交换剂为0.75，对薄壳型固定相为0.42。 死时间t M的测量比较困难，有以下几种方法： 3.分离条件的优化 赞秋忆末春短蕾坛程伏吏敛枢冗贰炎晦骄吮帘聘腥贞粳京扼撒牛盖繁答元HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化过程和定量计算公式的选择 2.由色谱柱的操作参数进行计算 t M =ΦηL2/△pd p2 式中，Φ为阻抗因子；η为流动相的动力黏度；L为柱长； △p为柱压力降；d p为固定相粒径 3.依据经验公式计算 当dc/dp≥10 时，可按下述公式计算 t M：