遗传学课件四.PDF

7.02 2001 年秋季 遗传学……课件四 公告：遗传学考试前的复习课 星期三，九月 26 号下午7-9 点在4-270 房间答疑（不是上课） I. ara::lacZ 翻移融合的制备及其稳定化 A. 用λ1205将mini-Tn10 转座子转入大肠杆菌菌株 pNK/BW140。 转座子基因随机插入到基因组。 B. 挑选出插入到基因组的转座子。 C. 在含阿拉伯糖的麦康培养基平板上筛选Ara-突变体。 1． 由araBAD 基因编码的酶负责将L-阿拉伯糖转换为D-木酮糖-磷酸盐。 2． araBAD的表达受araC 调节。 3． AraC 表达与阿拉伯糖的存在与否无关。 4． D. 选择与纯化突变体以建立纯的单一克隆（遗传课2.5）。 E. 进一步辨别ara与lacZ突变体的表型（遗传课3）。 1． 筛选Ara－突变体表型。 ·划线到含阿拉伯糖的M9培养基平板上。Ara－突变体不能在这些培养基上生长是因为它们 没有可利用的碳源。 ·也划线培养在M9葡萄糖培养基。有可能检验出第二种营养缺陷型突变体。 ·划线在含阿拉伯糖和卡那霉素的麦康培养基平板上。（生长的菌落将显示划线可能出现的 各种问题）。 ·划线顺序为从最贫瘠（含阿拉伯糖的M9培养基）培养基开始，最后到最丰富(含阿拉伯糖 和卡那霉素的麦康培养基)的培养基。 ·接种适当的对照菌株。 2． 检验lacZ是否被转录和翻译以及转录是由阿拉伯糖诱导的还是组成型表达的。 ·用两种培养基来辨别lacZ是组成型表达的还是阿拉伯糖诱导表达的插入。在这两种培养 基上诱导和组成型表达的突变体表型如何？ 诱导表达 组成型表达 -- LB Ara X-gal Kan: 蓝色 蓝色 --LB X-gal Kan: 白色 蓝色 ·对照很重要诱导表达突变体在LB—Xgal培养基上看起来仅有一点点蓝色，不像组 成型表达的突变体那么蓝。 F. 用P1型转导鉴别和接种ara::lacZ 翻移融合（遗传课3.5） G. 稳定突变子 1. 为何需要稳定突变？（转座子依旧存在于细胞内。尽管在IPTG作用下转座酶基因不再进行 转录，但启动子仍能具有一定的活性。不希望ara::lacZ 翻移融合的转座子再次转座。 7.02 Fall 2001 Genetics Recitation #4 1 7.02 2001 年秋季 2. 如何来稳定突变子？P1转导 3. P1 噬菌体 ·能转染革兰氏阴性菌（大肠杆菌的细胞壁/外壳包被成分可发生革兰氏阴性反应）的噬菌 体。 ·在感染以后，噬菌体复制其DNA。它也能产生酶解宿主DNA的酶。 ·它也能合成用来包装头部和尾部的蛋白。 ·把DNA包装进头部。 --P1噬菌体不像一些其他的噬菌体，它不具有严紧的包装头部的特异性序列。 --它将会包装100kb的带有包装位点的DNA片断， 在宿主细胞内也会发生类似的现 象。 --1/1000的噬菌体将包装细菌DNA，这种噬菌体叫做缺陷型噬菌体。