与细胞中(p)ppGpp相关的环境胁迫信号感知与应激反应.doc

与细胞中(p)ppGpp相关的环境胁迫信号感知和应激反应 2120141293 王德美 摘要 (p)ppGpp，即鸟苷五磷酸或鸟苷四磷酸盐，是细菌细胞内的一种小分子信号物质，其合成和分解均由RelA/SpoT蛋白家族或Rel/Spo双功能蛋白调控。RelA/SpoT蛋白家族或Rel/Spo双功能蛋白可感知环境胁迫条件并通过(p)ppGpp代谢调控诱导细胞发生应激反应，如DNA 复制受阻、rRNA合成抑制及降解、基因的差别表达以及代谢酶的激活或抑制。 关键词 环境胁迫信号；互惠调控；应激反应；转录抑制及激活 正文 一、(p)ppGpp催化活性蛋白 1.(p)ppGpp催化活性蛋白的功能 在大肠杆菌和其他变形菌纲细菌细胞，RelA和SpoT酶家族严谨调控(p)ppGpp代谢。RelA 为核糖体蛋白，催化合成pppGpp或ppGpp合成。SpoT为胞质蛋白，在有Mn2+存在时，具有(p)ppGpp 水解酶活性和微弱的合成酶活性。而在一些革兰氏阳性菌以及蓝细菌细胞，染色体上含有Rel/spo同源基因，可编码具有(p)ppGpp 合成酶和水解酶双重功能的Rel/Spo同源蛋白(RSH)。胞内(p)ppGpp合成酶活性蛋白通过对环境胁迫的感知和催化调控信号分子(p)ppGpp合成的引发细胞应激反应的发生【1】。 2.(p)ppGpp催化活性蛋白对环境胁迫信号的感知 2.1 RelA/SpoT酶家族对环境胁迫信号的感知 2.1.1感知氨基酸饥饿的机制 在大肠杆菌中，当氨基酸缺乏时，非氨酰基化的tRNA 结合于核糖体的A 位点阻滞蛋白质的合成，多肽延伸时核糖体空置反应诱导RelA 合成(p)ppGpp。 2.1.2感知脂肪酸饥饿的机制 酰基载体蛋白(ACP)结合于SpoT 的TGS 结构域（可能具有调控与核苷类配体结合的功能）， 细胞中非酰基化ACP和酰基化ACP的比率可能影响这种结合。因此，脂肪酸饥饿改变SpoT 两种催化活性的平衡并导致合成酶活性升高， (p)ppGpp积累。 2.1.3感知其他营养胁迫的机制 SpoT 感知其他营养胁迫的机制可能更为复杂。如磷饥饿时， SpoT 的合成酶活性升高， 细胞积累(p)ppGpp； 在磷源充足条件下， 适配蛋白RssB 将生长稳定期转录因子σs (RpoS)运送至蛋白酶ClpXP 并使其降解。但在抗RssB 的抗适配蛋白IraP 存在时RssB 活性被抑制， 阻止σs 被蛋白酶ClpXP 降解， 因此IraP 可中和RssB 并激活RpoS 循环。磷饥饿时， SpoT 合成(p)ppGpp， 由此增加IraP的转录并提高σs 的稳定性， 并通过激活σs 控制的基因的转录使细胞适应磷饥饿胁迫【2】。 2.2双重功能Rel/Spo同源蛋白对环境信号的感知 双重功能的Rel/Spo活性调控可能具有与RelA相同的信号感知能力。尽管核糖体的结构已非常清楚， 但RSH 与核糖体之间的相互作用所知甚少。实验得知结核分枝杆菌的Rel羧基末端的点突变或缺失突变降低对核糖体空置反应有激活作用，表明其合成酶活性的激活信号由其亚基的羧基末端传递到氨基末端，二聚体的形成可能与这种激活作用有关【3】。 3. (p)ppGpp合成酶活性蛋白调控的分子机制 3.1RelA/SpoT蛋白家族 RelA/SpoT蛋白家族氨基末端具有合成结构域(Catalytic domain， CAD) 和水解结构域(Hydrolysis domain， HD)， 羧基末端有TGS(Threonyl-tRNA Synthetase-GTPase-SpoT proteins，(p)ppGpp 水平的变化可导致一系列重要生命过程的改变， DNA 复制受阻、以及代谢酶的激活或抑制等。 1.转录的抑制及激活 (p)ppGpp作用靶点是RNA 聚合酶，大多数的转录调控因子是通过与启动子或启动子附近区域的结合调控RNA 聚合酶(RNAP)的转录功能。但是 (p)ppGpp 不需要与调控序列或其他转录调控因子相互作用，而是直接与RNAP 结合调控转录。(p)ppGpp 转录抑制作用的一种可能的机制是(p)ppGpp 与DksA 一起降低RNAP 与DNA形成开放复合体的稳定性， 从而抑制如rRNA 启动子的转录【8】； (p)ppGpp 的转录激活作用主要包两种激活机制模型，一种是直接激活模型， (p)ppGpp和DksA 刺激RNAP 与DNA 形成稳定开放复合体的速率。直接机制也可能通过(p)ppGpp 促进持家Sigma 因子σ70 与RNAP 核心的亲和力而激活转录。另一种是间接激活机制通过(p)ppGpp 激活胞内由其他Sigma 因子σS、σH、σN和σE指导的基因转录。(p)ppGpp 改变持家Sigma因子σ70 与RNAP