实验十六质粒DNA的扩增与提取技术.PPT

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2017-08-05 发布于天津
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实验十六质粒DNA的扩增与提取技术

遗传学实验实验十六质粒DNA的扩增与提取技术（4学时）一、教学基本要求学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术。二、教学内容〖实验目的〗要求学生掌握碱裂解法提取质粒DNA的方法与技术。〖实验原理〗碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA的。在pH值介于12.0-12.5范围内，细菌染色体发生变性，线性的DNA双螺旋结构解开，而共价闭环质粒DNA具有紧密的超线团结构，不发生变性。当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，变性染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来，通过离心，可被除去。而共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，复性迅速而准确，保存在溶液中。〖材料和方法〗 1、设备：恒温培养箱、恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅、Eppendorf管、碱裂解溶液，酚、氯仿、乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶。 2、材料：含目的基因质粒的大肠杆菌。 3、方法：活化-扩增-离心-裂解-离心-抽提-沉淀-洗涤-溶解-电泳检测〖作业〗分析实验结果。 * *