第12章色谱法.pptVIP

* 固定相可以是固体吸附剂，也可以是涂浸在载体上的固定液 * 填充柱色谱的固定相可以是固体吸附剂，也可以是涂浸在载体上的固定液。毛细管色谱的固定相只是涂浸在载体上的固定液。 * 因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相流动速度相近。 * 碳数规律：在一定温度下，同系物保留值的对数与其分子中碳原子数成正比。沸点规律：在一定色谱条件下，同族具有相同碳数的碳链异构体，其保留值的对数与其沸点成正比。 A1、C、1A2、C2均为常数 。 * 一般色谱手册中提供许多物质的相对校正因子，可直接使用．但要注意检测器的类型，因为不同的检测器测得的校正因子不同．无数据可查时，可根据公式，设计试验，测定． * (二）、色谱定性方法 1.利用保留值与已知物质对照定性的方法 (1) 利用保留时间定性： 　　在同一色谱条件下，保留时间相同的可能是同一物质。 (2)利用峰高增量定性： 　　加入纯物质能使某组分增加峰高，则二者可能是同一物质。 (3)利用双色谱系统定性: 　　改变色谱条件以改变分离的选择性，使不同的物质显示不同的保留值。 3.利用文献保留值定性 (1) 利用相对保留值r21定性 相对保留值r21仅与柱温和固定液性质有关。在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。 2.利用保留值经验规律定性 (1)碳数规律:在一定的温度下，同系物保留值的对数值与其分子中碳原子数成正比： 　　　　lgtR’=A1n + C1 (2)沸点规律：在一定的色谱条件下，同族具有相同碳数的碳链异构体，其保留值的对数与沸点成正比。 　　　 lgtR’=A2Tb + C2 (2).保留指数定性法： Kovats指数(Ⅰ)是一种重现性较好的定性参数。 测定方法： 将正构烷烃作为标准，规定其保留指数为分子中碳原子个数乘以100（如正己烷的保留指数为600）。 其它物质的保留指数（IX）是通过选定两个相邻的正构烷烃，其分别具有n和n＋1个碳原子。被测物质X的调整保留时间应在相邻两个正构烷烃的调整保留值之间如图所示： 求出未知物的保留指数，然后与文献值对照，即可定性鉴定未知物。 tR(n) tR(n+1) tR(x) （三） 色谱定量分析方法 定量分析的任务是求出混合样品中各组分的百分含量。色谱定量的依据是，当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓度）与检测器给出的响应信号成正比。即： mi = fi ? Ai 式中mi为被测组分i的质量； Ai为被测组分i的峰面积； fi为被测组分i的校正因子。 1. 峰面积的测量 （1）峰高（h）乘半峰宽（W1/2）法：近似将色谱峰当作等腰三角形。此法算出的面积是实际峰面积的0.94倍： A = 1.064 h·W1/2 （2）峰高乘平均峰宽法：当峰形不对称时，可在峰高0.15和0.85处分别测定峰宽，由下式计算峰面积： A = h·（W0.15 + W0.85 ）/ 2 （3）自动积分和微机处理法 2. 定量校正因子 试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即： m i = fi ·Ai 绝对校正因子：比例系数f i ，单位面积对应的物质量： f i =m i / Ai 相对校正因子f ’i ：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比。 3.常用的几种定量方法 （1）归一化法： 特点及要求： 归一化法简便、准确； 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大； 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。 （2）内标法 内标物要满足以下要求： （a）试样中不含有该物质； （b）与被测组分性质比较接近； （c）不与试样发生化学反应； （d）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响。 试样配制：准确称取一定量的试样m试样，加入一定量内标物mS 计算式： 作业: P241 14, 15, 19 第四节 高效液相色谱法 (HPLC) High Performance Liquid Chromatography 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱。 一、高效液相色谱的特点