种子制备与菌种保藏素材.ppt

9、基因工程菌的保藏 由载体质粒等携带的外源DNA片段通常是遗传不稳定的、且很易丢失其外源质粒复制子。质粒基因通常为宿主细胞生长非必需。 一般情况下当细胞丢失这些质粒时，生长速度会加快。 当培养基中加入抗生素时，抗生素提供了一有利于携带质粒的细胞群体的极有用的生长选择压。而且在运用基因工程菌进行发酵时，抗生素的加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。 我们建议基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。 普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC） 中国科学院微生物研究所，北京 中国科学院武汉病毒研究所，武汉。 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC） 中国农业科学院土壤肥料研究所，北京。 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 中国食品发酵工业科学研究所，北京。 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC） 中国医学科学院皮肤病研究所，南京 中国药品生物制品检定所，北京。 中国预防医学科学院病毒学研究所，北京 中国抗生素菌种保藏管理中心（CACC） 中国医学科学院医药生物技术研究所，北京； 四川抗生素工业研究所，成都； 华北制药集团抗生素研究所，石家庄。 兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC） 中国兽医药品监察所，北京。 林业微生物菌种保藏管理中心（CFCC） 中国林业科学研究院，北京。 中国典型培养物保藏中心 （CCTCC） 武汉大学 ， 武汉。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第四章 种子制备与菌种保藏 第一节 种子制备（Inoculum development） 定义：由保藏的菌种开始，经过逐级扩大培养，最后获得供生产车间发酵罐接种的的足够数量和优质质量的种子。 生产菌种的必备条件： 1 生长快： 2 对环境条件要有比较大的承受能力 3 遗传表现型要稳定，不易退化 4 菌种要纯 斜面 沙土管 冷干管 液氮管 实验室种子制备 生产现场种子制备 生产种子制备的一般流程 二级斜面 一级斜面 米孢子 母瓶 子瓶 一级种子罐 发酵罐 二级种子罐 三级种子罐 菌种保藏 几个概念 种子罐级数：种子在种子罐中需扩大培养的次数。 发酵级数：种子罐的级数加一。 接种量：放罐的种子罐的培养液体积除以接种后培养液的体积的百分数。 种龄：生产种子的培养时间。 一 斜面种子的制备 1.斜面种子：在试管或扁瓶内，以琼脂固化的培养基表面上生长的菌种培养物。 2. 制备流程： 3. 制备过程注意事项 (1)??琼脂要完全浸没在营养液内,用量1.0%-2.5% ( 2) 营养液中最好不含易沉淀的固形物； (3) 装量掌握在斜面顶端不超过试管或扁平长度的2/3； (4) 灭菌后垂直放置至稍冷后再斜放，以减少冷凝水 (5) 微量元素先配制成一定的溶液，用移液管定量加入 在无菌间超净工作台进行接种操作 3. 质量检查 (1)??外观检查 ( 2)??无菌检查 ( 3)摇瓶生产能力检查 4.影响斜面种子质量的因素 (1)原材料质量，水质，培养基pH， (2)灭菌条件， (3)接种量， (4)培养室温度、湿度、通风、 (5)培养时间， (6)有害气体或挥发物（培养室内不要安紫外灯） (7) 冷藏条件 二 、米粒种子（米孢子） 1. 米孢子：将霉菌或放线菌接种到灭菌后的大米或小米颗粒上，恒温培养一段时间后产生的分生孢子。 2 . 米孢子制备工艺流程 3.?制备过程注意事项 （1）浸泡时间及加营养液量应掌握在灭菌后米粒熟透但不粘连； （2）分装量应掌握在平铺后有2-3粒米的厚度 （3）米粒不要碰到瓶塞； （4）培养前期应经常摇动米粒，使微生物在米粒表面生长均匀，气生菌丝及孢子长成后不再摇动。 （5）保存：冰箱保存；真空干燥保存；10%-20%甘油浸泡保存 4. 质量标准 （1）无杂菌污染 （2）孢子数足够，发芽率高 （3）生产