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第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术 本章教学目的与要求: (1)掌握组织培养实验室的设计; (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法; (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 (4)掌握灭菌和消毒的区别; (5)掌握灭菌的不同方法和具体操作过程; (6)掌握无菌接种的步骤; (7)掌握外植体的培养方法和步骤; (8)一般掌握外植体褐变和玻璃化的处理方法; (9)掌握试管苗驯化的基本程序; 第1章 植物组织培养实验室 构建及操作技术 第一节 商业性组织培养实验室和小工厂的 设计与主要设备 二、仪器设备和器皿用具 1、超净工作台或接种箱 2、空调 3、除湿机或加湿器 4、恒温培养箱 5、高压灭菌锅 6、冰箱 7、天平 8、显微镜 9、水浴锅 10、摇床与转床 11、蒸馏水发生器 12、酸度计 13、离心机 1、培养器皿:试管、三角瓶、培养皿、 圆形培养瓶、果酱瓶2、分注器3、离心管4、刻度移液管5、细菌过滤器6、实验器皿:量筒、烧杯、容量瓶、 试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等。 1、镊子:尖头镊子、枪形镊子 2、剪子 3、解剖刀 4、接种针 5、钻孔器 第二节 培养基及其配制 一、培养基的成分 1、无机营养元素(inorganic element) 1)大量元素:指浓度大于0.5mmol/L的元素。 [N、P、K、Mg、S和Ca等]。 2、有机化合物(organic compound) 在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 种类:VBl(盐酸硫胺素)、 VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、 Vc(抗坏血酸)、 VH(生物素)、 VB11(叶酸)、 VB12(钴胺素)等。 使用浓度:一般用量为0.1—1.0mg/L。 又叫环己六醇,在糖类的相互转化中起重要作用。 使用浓度:一般为lOOmg/L, 作用:适当使用肌醇,能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用,对细胞壁的形成也有作用。 作用:是很好的有机氮源,可直接被细胞吸收利用。 种类:最常用的是甘氨酸,其他的如精氨酸、谷氨酸,谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 使用浓度:为10—200mg/L。 3、有机附加物 (天然复合物) 4、植物生长调节物质(hormone) *作用:主要被用于诱导愈伤组织形成;促进细胞脱分化;促进细胞伸长;促进生根。 在促进生长方面,根对生长素最敏感。在极低的浓度下,(10-5—10-8mg/L)就可促进生长,其次是茎和芽。 吲哚乙酸:IAA(indo acetic acid) 萘乙酸:NAA(naphthalene acetic acid) 吲哚丁酸:IBA(indolebutyri acid) 2,4-二氯苯氧乙酸:2,4—D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) 生长素作用强弱顺序: 种类: 6—BA(6—苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) 细胞分裂素作用强弱顺序 GA3(赤霉酸): 作用:促进幼芽伸长生长,促进不定胚发育成小植株。 赤霉素和生长素协同作用,对形成层的分化有影响:当生长素/赤霉素比值高时有利于木质部分化,比值低时有利于韧皮部分化。 5、培养材料的支持物 ---琼脂(agar) 固体培养时最好的固化剂。 用量:6—10g/L。 琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物,本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中,成为溶胶,冷却至40 ℃即凝固为固体状凝胶。 琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外,还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关,长时间的高温会使凝固能力下降,过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解,丧失凝固能力。时间过久,琼脂变褐,也会逐渐丧失凝固能力。 固体培养基的特点(与液体培养基相比): 6、抗生物质(antibiotic) 种类:青霉素、链霉素、庆大霉素等。 浓度:5—20mg/L。 作用:可防止菌类污染。 7、活性炭(active carbon) 目的:是利用其吸附能力,减少一些有毒物质的影响;利于生根。 使用浓度:1—5g/L。 它的颗粒大小决定着吸附能力:粒度越小,吸附
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