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时间分辨化学发光测定微量蛋白质的研究.pdf
V01．25 高等学校化学学报 Suppl．
2 004年4月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 161～162
时间分辨化学发光测定微量蛋白质的研究
李正平1，范双双1’2，张丽娜1，石生勋1
(1．河北大学化学与环境科学学院，保定071002；2．承德民族师范学院化学系，承德067000)
关键词时间分辨技术；化学发光测定；微量蛋白质
随着对蛋白质组学研究的发展，需要分离、鉴定更微量的蛋白质组分．常规的蛋白质分析方法(如
有较高的灵敏度，但需要昂贵的荧光探针或复杂的操作过程．蛋白质与Cu(Ⅱ)的不饱和配合物对
Luminol化学发光反应具有强烈的催化作用，据此，应用流动注射分析(FIA)可测定0．1pg／ML的蛋
白质的灵敏度提高约1个数量级．
图1是Cu(1I)及蛋白质和Cu(Ⅱ)配合物在
j
pH=9．6的硼酸盐缓冲溶液中的CL动力学曲线，
茹
S 台
a和c是溶液中自由Cu(11)的CL信号，它在0．6
咎
皇
达到最大并很快衰减．b和d分别是Cu(OH)。及
占
一
Cu(Ⅱ)和蛋白质配合物的CL信号，分别在102．5
o
S和72．0S达到最大，并缓慢衰减．由此可见，应
用时间分辨方法，可以很容易地分辩并测量由蛋白
质产生的CL信号．
在所选的实验最佳条件下，将蛋白质样品与 Chemiluminescence for
Fig．1 intensity—timeprofiles
1×10-5
mol／L的Cu(Ⅱ)在H3803一NaOH缓冲溶
1×10—5mol／L
Cu(Ⅱ)and1．0 BSA(B)
液中混合，于室温放置45min．将100弘L混合液 IJg／mL
Bothin0．002 bufferwith
与200肚LCL试剂混合并立即在BPCL化学发光分 mol／LH3803一NaOH ph一9．6．
TheCL consistsof5×10—4mol／LLuminol，
析仪中测量CL信号，由此可以灵敏地测定0．01～ reagent
1×1 0．01
0一mol／LHz02，andmol／LNazC03一NaHCOa
5．0弘g／mL的牛血清蛋白(BSA)．有关线性方程、
buffer(pH=11．4)．
检出限及相关系数列于表1．
V。
Ta
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